Прикордонне виділення дієтичної корови; s Вироблені з молока пептиди у харчуванні грудного молока

Харчові та харчові технології

Редаговано
Антоніо М. Перес

Політехнічний інститут Браганса (IPB), Португалія

Переглянуто
Стефано Сфорца

Університет Парми, Італія

Арміндо Мело

Фармацевтичний факультет Університету Порту, Португалія

Джоост Гау

Nutricia Research (Нідерланди), Нідерланди

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

дієтичної

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 Національна дослідницька рада (CNR), Інститут харчових наук, Авелліно, Італія
  • 2 Кафедра поступальної медичної науки, Неаполітанський університет "Федеріко II", Неаполь, Італія
  • 3 CEINGE Advanced Biotechnologies, Неаполітанський університет “Федеріко II”, Неаполь, Італія
  • 4 Департамент сільського господарства, Парко Гуссоне, Неаполітанський університет “Федеріко II”, Портічі, Італія
  • 5 Європейська лабораторія з вивчення харчових захворювань, Неаполітанський університет "Федеріко II", Неаполь, Італія
  • 6 Робоча група з вивчення мікробіомів, Університет “Федеріко II”, Неаполь, Італія

Вступ

Грудне молоко містить антигенно активні харчові алергени, що виникають з раціону матері (1). Це твердження в основному ґрунтується на імунохімічних даних та клінічних дослідженнях, проведених у 1980-90-ті роки (4–6). У ті роки було чітко встановлено, що харчові алергени, отримані з раціону матері, можуть викликати клінічні прояви побічних реакцій у чутливих новонароджених, що перебувають на грудному вигодовуванні, із частотою захворюваності 0,5% (7–10). Кілька досліджень зафіксували наявність у грудному молоці змінних кількостей інтактних харчових алергенів, включаючи овальбумін (11), гліадин (12), арахіс (2, 13) та білки коров’ячого молока (10). Повідомляється, що харчові алергени в жіночому молоці змінюються в дуже широкому діапазоні концентрацій від трохи вище 0,1 до> 1000 нг/мл (3), але низькі рівні ppb (нг/мл), мабуть, найбільш реалістичні показники (14).

Пошук алергенів на коров’ячому молоці в грудному молоці був предметом гарячих досліджень. Людський та бичачий β-казеїн, αs1-казеїн та α-лактальбумін мають середній та високий ступінь гомології послідовності (53, 31 та 73% гомології відповідно) і, отже, певну перехресну реакцію імунітету. Отже, β-лактоглобулін (β-Lg), який не експресується людиною, часто спостерігався як маркер коров’ячого молока. Згідно з імунохімічними даними, на виведення дієтичних харчових алергенів у грудне молоко, як правило, впливає помітна мінлива та внутрішньо-індивідуальна мінливість (11, 14–16). З особливим занепокоєнням щодо алергенів на коров’ячому молоці екзогенний β-Lg був виявлений лише у обмеженій кількості зразків молока матері, і його наявність не пов’язана з атопічними чи неатопічними станами (15). У лонгітюдному дослідженні, проведеному протягом усього періоду лактації, 93 з 232 (тобто 40%) зразки грудного молока, отримані від 25 здорових донорів, містили помітну кількість дієтичного β-Lg (16). Лише у двох матерів виявляли β-Lg у всіх зразках молока, тоді як молоко шести матерів не містило його жодного разу. Нещодавно Матангкасомбут та ін. (17) повідомили, що дієтичний β-Lg зберігався в жіночому молоці навіть до 7 днів після споживання коров'ячого молока.

Шокер та ін. (23) використав двовимірний електрофорез/вестерн-блот та MS для дослідження проникнення негідролізованого Ara h 2 та інших арахісових алергенів у грудне молоко. Цікаво, що вони також аналізували зразки людського молока за допомогою конкурентного ІФА, щоб кількісно визначити можливі стійкі до травлення пептиди, отримані з арахісових білків.

Вперше ми використали РС для виявлення пептидів, що виникають в результаті перетравлення бичачого казеїну та білків сироватки, що виділяються в грудне молоко годуючих донорів після перорального прийому коров’ячого молока (24). Зокрема, фрагменти β-Lg та αs1-казеїну великої рогатої худоби були виявлені у 12% -ній розчинній у трихлороцтовій (TCA) фракції двох та одного з шести зразків грудного молока відповідно. На противагу цьому, пептиди β-Lg, ідентифіковані за допомогою MS з високою роздільною здатністю/чутливістю, уникли конкурентного тесту ELISA, проведеного на нефракціонованому молоці, припускаючи, що вони можуть виникати з дуже низьким вмістом. Як і очікувалося, у контрольних зразках молока, отриманих у шести жінок, що годують, що дотримуються суворої дієти, що не містить молока та щоденників, не було пептидів, отриманих з коров'ячого молока. Відсутність інтактного β-Lg у виявлених кількостях у будь-яких зразках грудного молока було підтверджено електрофорезом додецилсульфату натрію та поліакриламідного гелю (SDS-PAGE) та вестерн-блот-аналізом 12% -ної нерозчинної в ТСА білкової гранули. Зовсім недавно Чжу на співавт. (25) отримали висококурований перелік нелюдських пептидів у жіночому молоці на основі даних MS, і пептиди, отримані з коров’ячого молока, були найбільш представленими видами.

У цьому дослідженні ми прагнули відстежувати можливу внутрішньо-індивідуальну мінливість дієтичних пептидів коров’ячого молока в жіночому молоці. З цією метою ми націлили пептиди, отримані з бичачого молока, в грудному молоці, відібрані у одного донора до і після відповідних пероральних навантажень коров’ячого молока в різні дні. Крім того, грудне молоко відбирали у тієї самої годуючої матері протягом 6 годин (п’ять часових точок) після вживання коров’ячого молока. Янссен Дуйгхуйзен та ін. (26) елегантно підкреслив можливість того, що пептиди, отримані з їжі різної довжини, можуть потрапляти під дію ендогенних антитіл у рідинах організму. Таким чином, на додаток до 12% -ної розчинної в ТСА фракції, ми проаналізували триптичні дайджести нерозчинних білкових гранул за допомогою ВЕРХ-МС/МС.

Матеріали і методи

Діотитрейтол (DTT), йодоацетамід (IAA), гуанідин, трифтороцтова кислота (TFA), бікарбонат амонію (Ambic), трис-основа, EDTA та інші хімічні речовини придбані у Sigma-Aldrich (Сент-Луїс, Мічиган, США). Розчинники марки ВЕРХ-МС отримували від Carlo Erba (Мілан, Італія). Ізолят сироваткового білка великої рогатої худоби, що використовується для приготування позитивних контролів, був отриманий від Fonterra Dairy Co. через Інститут Ріддетта, Нова Зеландія.

Відбір проб

Всього 18 проб грудного молока (5 мл) було отримано за допомогою молоковідсмоктувача, оснащеного пластиковими одноразовими насосними установками. Зразки були зібрані протягом другого та третього місяця лактації після пологів у неатопічного здорового донора (28 років), який доставив у термін. Зразки грудного молока (

5 мл) збирали протягом різних днів між 2 та 3 годинами після 200-мл перорального завантаження пастеризованого бичачого молока. Молоко зціджували в пластикові стерильні пробірки, змішували з інгібітором серин-протеази (Pefabloc ®, Sigma, Сент-Луїс, Мічиган, США, кінцева концентрація 1 мМ) і негайно заморожували при -20 ° C для запобігання небажаному гідролізу.

Первинний скринінг проводили на зразках грудного молока, відібраних у донора протягом 5 різних днів. Ці зразки були позначені як D1, D2, D3, D4 та D5. Мама, що годує, дотримувалася суворої дієти, в якій не було коров’ячого молока та молочних продуктів протягом принаймні 1 тижня. Загалом було відібрано та проаналізовано 10 зразків шляхом збору грудного молока до і після годування дитини кожного дня відбору проб. Зразки серії D проводились у двох примірниках. Три контрольні зразки молока (базові лінії) були зібрані до того, як матері дали коров'яче молоко.

Після оцінки присутності пептидів, отриманих з бичачого молока, в грудному молоці, від тієї ж матері були отримані додаткові зразки. У цьому випадку грудне молоко збирали протягом 6-годинного періоду з інтервалами часу (1, 2, 3, 4 та 6 год) після перорального завантаження бичачого молока. Ці зразки розроблені як Т0 (базовий рівень), Т1 (1 год), Т2 (2 год), Т3 (3 год), Т4 (4 год) та Т5 (6 год) та аналізовані за допомогою ВЕРХ-МС/МС в триразовий. Кваліфікований оператор кафедри трансляційної медицини Неаполітанського університету "Федеріко II" (Італія) контролював введення бичачого молока, збір зразків та маркування кодів. До збору зразків молока від матері була отримана письмова інформована згода.