Регульована вниз lncRNA HOTAIR полегшує синдром полікістозу яєчників у щурів за рахунок зменшення експресії
Бін Цзян
1 відділення гінекології, Третя лікарня Сіанья Центрального Південного університету, Чанша, Китай,
Мін Сюе
1 відділення гінекології, Третя лікарня Сіанья Центрального Південного університету, Чанша, Китай,
Дабао Сю
1 відділення гінекології, Третя лікарня Сіанья Центрального Південного університету, Чанша, Китай,
Пісня Цзяю
1 відділення гінекології, Третя лікарня Сіанья Центрального Південного університету, Чанша, Китай,
Шуджуан Чжу
1 відділення гінекології, Третя лікарня Сіанья Центрального Південного університету, Чанша, Китай,
Анотація
1. ВСТУП
Синдром полікістозних яєчників (СПКЯ) - найчастіший ендокринний розлад у жінок у репродуктивному віці, який пов’язаний з гіперінсулінемією, гіперандрогенемією та аберрантною адипокінами з жирової тканини. якість життя пацієнтів.2 Захворюваність на СПКЯ становить 6% -10% відповідно до критеріїв Національного інституту охорони здоров'я, що досягає 15% на основі ширших критеріїв Роттердама.3 СПКЯ характеризується збільшенням строми яєчників та антральних фолікулів, на додаток до потовщення кори яєчників та гіперплазії тека-клітин.4 Жінки із СПКЯ дуже вразливі до ановуляції та безпліддя, і навіть такі фактори ризику (ожиріння, аномальна маткова кровотеча та діабет), що сприяють розвитку раку ендометрія. на роль молекулярних мішеней у лікуванні СПКЯ, які включають довгі некодуючі РНК (lncRNAs), м мікроРНК (miРНК) та відповідні гени-мішені. 6, 7, 8
2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
2.1. Дослідні тварини
2.2. Створення моделі та ідентифікація СПКЯ
З 23-денного віку щурам СПКЯ підшкірно вводили сульфат дегідроепіандростерону (DHEA) та сульфат прастерону натрію (9 мг/100 г маси тіла) та 0,4 мл води для ін’єкцій, що тривало 20 днів. Щурам нормальної групи щодня вводили 0,4 мл води для ін’єкцій в один і той же час. Через 20 днів щурів позбавляли їжі на 12 годин. Потім яєчники витягували. За допомогою вагінальних мазків визначали естральний цикл. Для ідентифікації моделей були застосовані сироваткові гормональні рівні, фарбування гематоксилін-еозином (ВІН), трансмісійний електронний мікроскоп (ТЕМ) та термінальна дезоксинуклеотидилтрансфераза-аналіз dUTP (TUNEL). Коли моделі визначили успішними, щурів кожної групи обробляли відповідно наступного дня, і безперервне введення тривало протягом 7 днів.
2.3. Імуноферментний аналіз (ІФА)
Щури всіх груп були позбавлені їжі, але не води після останньої ін'єкції. Після забору крові з серця виділяли сироватку. ІФА використовували для визначення рівня сироваткового стимулюючого гормону (ФСГ), лютеїнізуючого гормону (ЛГ), тестерону (Т) та естрадіолу (Е2) (Нанкінський інститут біоінженерії Нанкін, Нанкін, Цзянсу, Китай). Щурів евтаназували шляхом вивиху шийки матки, витягуючи обидва яєчники. Спостерігали морфологію та колір яєчників. Вагу вимірювали та реєстрували.
2.4. Фарбування гематоксиліном та еозином
Одну сторону яєчника готували і фіксували в 10% формальдегіді протягом більше 24 годин. Потім яєчник зневоднювали в градієнтному етанолі, просочували ксилолом і занурювали в парафін після занурення у віск. Яєчник розрізали на зрізи товщиною 4 мкм. Згодом зрізи депарафінізували та гідратували з подальшим фарбуванням ВІН. Після обробки градієнтним етанолом пофарбовані зрізи проникли ксилолом і змонтували в нейтральному бальзамі. Морфологічні структури фолікулів яєчників спостерігали під світловим мікроскопом.
2.5. Трансмісійний електронний мікроскоп (ТЕМ) для спостереження за ультраструктурою фолікулів яєчників
Одну сторону яєчника готували і фіксували у 2% глутаральдегіді протягом 24 годин з подальшим нарізанням на блоки (1 мм 3). Блоки яєчників занурювали на ніч після багаторазового промивання 0,1 моль/л фосфатно-сольовим сольовим розчином (PBS). Потім блоки фіксували в 1% осмічної кислоти при 4 ° С протягом 2 годин з наступним промиванням деіонізованою водою протягом трьох разів (5 хв на промивання). При 4 ° С блоки яєчників зневоднювали в градієнтному ацетоні і вбудовували, з подальшою полімеризацією при 70 ° С протягом 36 годин. Далі блоки розрізали на напівтонкі зрізи, які фарбували блакитно-метиленовим синім і локалізували під світловим мікроскопом. Потім зрізи були зроблені на надтонких зрізах, оброблених подвійною електронною плямою цитрату уранілацетату та свинцю. У рамках ТЕМ спостерігали та фотографували ультраструктури клітин гранульози яєчників, клітин тека та лютеїну.