Синергічна серцева патологічна гіпертрофія, спричинена дієтою з високим вмістом солі в IGF-IIRα, специфічна для серця

Філіальна школа післябакалаврської китайської медицини, Коледж китайської медицини, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань

патологічна

Ролі Формальний аналіз, написання - оригінальний проект

Інститут фундаментальних медичних наук, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань

Ядро дослідницьких перекладів, лікарня Китайського медичного університету, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань

Ролі Курація даних

Афілійований відділ кардіології, лікарня Китайського медичного університету, Тайчжун, Тайвань

Філіальна школа китайської медицини, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань

Відділення внутрішньої медицини відділення кардіології загальної лікарні збройних сил Тайчжун, Тайчжун, Тайвань

Афілійоване відділення хірургії Медичного факультету Медичного коледжу Тайбейського медичного університету, Тайбей, Тайвань

Афілійований відділ біотехнологій, Університет Бхаратіар, Коімбатор, Індія

Співпрацювали в цій роботі з: Вей-Вень Куо, Чі-Ян Хуан

Афілійований відділ біологічних наук і технологій, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань

Порівну сприяв цій роботі разом з: Вей-Вень Куо, Чі-Ян Хуан

Ролі Концептуалізація, придбання фінансування, адміністрування проектів, ресурси

Медичний коледж, лікарня Хуалянь-цзи-чи, Буддистський медичний фонд Цзи-чі, Університет Цзи-Цзи, Хуалянь, Тайвань, Департамент медичних досліджень, Китайська лікарня медичного університету, Китайський медичний університет, Тайчжун, Тайвань, Департамент біотехнологій, Азіатський університет, Тайчжун, Тайвань

  • Руї-Лін Чанг,
  • Шрінівасан Нітіянантхем,
  • Чі-Ян Хуан,
  • Пей-Інь Пай,
  • Тун-Ті Чанг,
  • Лай-Чін Ху,
  • Рей-Джейд Чен,
  • В. ВіджаяПадма,
  • Вей-Вень Куо,
  • Чі-Ян Хуан

Цифри

Анотація

Цитування: Chang R-L, Nithiyanantham S, Huang C-Y, Pai P-Y, Chang T-T, Hu L-C та ін. (2019) Синергічна серцева патологічна гіпертрофія, індукована дієтою з високим вмістом солі у серцево-специфічних трансгенних щурів IGF-IIRα. PLoS ONE 14 (6): e0216285. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0216285

Редактор: Луїс Едуардо М. Квінтас, Федеральний університет Ріо-де-Жанейро, БРАЗИЛІЯ

Отримано: 18 вересня 2018 р .; Прийнято: 17 квітня 2019 р .; Опубліковано: 18 червня 2019 р

Наявність даних: Усі відповідні дані містяться в роботі.

Фінансування: Це дослідження було підтримане Китайським медичним університетом - 105-S-07, Тайвань; Китайський медичний університет та лікарня - 02, Тайвань; Азійський університет - 106, Тайвань. Фінансисти не мали жодної ролі у розробці досліджень, зборі та аналізі даних, прийнятті рішення про публікацію чи підготовці рукопису.

Конкуруючі інтереси: Автори заявили, що не існує конкуруючих інтересів.

Вступ

Нещодавно ми виявили нові альтернативні способи сплайсингу усіченого IGF-IIR за допомогою швидкої ампліфікації кінців кДНК (RACE) та аналізу послідовностей. У цьому фрагменті не було сегмента екзона 1–9 IGF-IIR, але він складався з інтрону 9 (nt 645–806) - екзону 10 - інтрону 36 (nt 1–455). Схема експресії мРНК для праймера, специфічного для інтрон 9 (nt 645–806), виявила його експресію в серці, мозку, печінці, плаценті та яєчках щурів. Крім того, ми також підтвердили, що ця транскрипція може кодувати білок з 1359 амінокислотами з початковим кодоном при 231 bp (екзон 10) і зупиняючим кодоном при 4307 bp (intron 36). За допомогою аналізу послідовності ми виявили, що амінокислоти усіченого білка відповідають IGF-IIR, за винятком С-кінцевої 15 амінокислоти. Ми назвали новий білок як IGF-IIRα і мали на меті виявити його біологічне значення та участь у серцевій патофізіології.

IGF-IIRα регулює серцевий апоптоз шляхом зниження регуляції виживання білків AKT/PI3K і посилення активації каспази 3. Крім того, надмірна експресія IGF-IIRα регулює серцевий фіброз за допомогою сигналізації uPA/tPA/TGF-β та вищого накопичення колагену та ще більше погіршує його дію у високосоленому стані [11]. У цьому дослідженні ми мали на меті визначити, чи бере участь новий IGF-IIRα у гіпертрофії серця та подальшу його функціональну роль у гіпертонічній серцевій недостатності, спричиненій високим вмістом солі in vivo. Потім ми хотіли б дослідити, чи може IGF-IIRα бути новою потенційною терапевтичною мішенню для серцевої недостатності.

Матеріали і методи

Антитіла та реактиви

Всі хімічні речовини та реагенти були закуплені у Sigma-Aldrich, США. Для вестерн-блоттінгу первинні антитіла p-ERK, p-JNK, p-P38 були придбані у Cell Signaling, США. IGF-IIR, AT1R, NFATC3, ANP, BNP, α-тубулін, p-PKC (Abcam, США) та GAPDH, SIRT1, Gαq, p-GATA4 (Санта Круз Біотехнологія, США). Всі вторинні антитіла (анти-кролик, миша та коза, кон'юговані з HRP антитіла) були закуплені у Санта Круз Біотехнологія, США.

Трансгенна конструкція

Трансгенна конструкція включає промотор rMYH6, 3HA-IGF-IIRα-A2 (NCBI) BAC ДНК. 3HA-IGF-IIRα-A2 ампліфікували і лігували у вектор експресії промотору rMYH6. Послідовності праймерів, що використовуються, включають IGF-IIRα: 5’IGF-IIRα-KnpI: 5’-TTGGTACCGAATGAGTGTCATAAACTTTGAG-3 ’та 3’-IGF-IIRα-XbaI: 5’-CCCTCTAGAAGTCATGTCGGCTGCTGTGAGTGA-TGTGTGTGAGTGA. Далі ми успішно субклонували IGF-IIRα на всю довжину в pcDNA3.1-myc-His, керований серцево-специфічним промотором α-MHC, шляхом пронуклеарної мікроін’єкції та розробили IGF-IIRα на експресійних трансгенних щурах (TG). Позитивні засновники були ідентифіковані за допомогою ПЛР і зворотно переведені на WT. Генотипування проводили методом ПЛР-аналізу з конкретними праймерами. Прямий праймер 5’-TAGCAAACTTCAGCCACCCTTC-3 ’і Зворотний праймер 5’-ACTTCCACTCTTATCCACAGCACAC-3’, які були розроблені для посилення фрагмента 739bp.