Виснаження клітин Купфера печінки перешкоджає розвитку печінкового стеатозу, спричиненого дієтою
В.Х. та А.М. внесли однаковий внесок у цю роботу.
Статті Рисунки та таблиці
Цифри
Вплив виснаження KC на тригліцериди печінки, DAG, керамід та холестерин у відповідь на дієту з високим вмістом жиру або сахарози. Самці щурів Wistar, у яких не було КС або контрольних щурів, піддавались дієті з високим вмістом жиру або сахарози протягом 2 тижнів, як описано в розробці та методах дослідження. Згодом тварин вбивали після нічного голодування, виділяли печінку та визначали вміст тригліцеридів (A), DAG (B), холестерину (C) та кераміду (D) у печінці. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у кожній групі.
Вплив виснаження КС на розвиток резистентності до інсуліну печінки на дієті з високим вмістом жиру або сахарози. Самці щурів Wistar, виснажених KC або контрольних щурів, піддавались дієті з високим вмістом жиру (A і B) або високим вмістом сахарози (C і D) протягом 2 тижнів. Згодом тварини голодували протягом ночі, а потім їм піддавали 4 мО · кг -1 кг/хв -1 евглікемічно-гіперинсулінемічного затиску у присутності [3-H 3] -глюкози для вимірювання чутливості печінкового інсуліну, як описано в проекті дослідження та методах. Оцінювали вихід глюкози в печінці (A і C) та пригнічення виведення глюкози в печінці (B і D). Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири в кожній групі.
Виснаження KC GdCl3 в печінці та жировій тканині. Самці щурів Wistar виснажували KC шляхом введення GdCl3, як описано в розробці та методах дослідження. Потім було виділено печінку та жирову тканину, а наявність макрофагів визначали за допомогою qRT-PCR оцінки рівнів мРНК CD68/ED1 та F4/80 (A та B) та підрахунку CD68/ED1-позитивних клітин після імуногістохімічного фарбування печінки та зрізи жирової тканини (C – F), як описано в проекті та методах дослідження. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у кожній групі для qRT-ПЛР та n = 3 для імуногістохімічного аналізу CD68/ED1-позитивних клітин. (Якісне цифрове зображення цього показника доступне в Інтернет-випуску.)
Експресія генів ліпідного обміну в печінці щурів, що харчуються SC-, HF- та HS, з або без введення GdCl3. Самці щурів Wistar виснажували KC шляхом введення GdCl3, як описано в розробці та методах дослідження. Згодом було виділено печінку, вилучено РНК, а експресія ряду генів ліпідного метаболізму визначалася методом qRT-PCR. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири в кожній групі.
Вплив M1-поляризованих KC на окислення та етерифікацію жирних кислот гепатоцитів та накопичення тригліцеридів. Гепатоцити та КС виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як описано у дослідницькій розробці та методах. Згодом ефекти зазначеного впливу на окиснення жирних кислот, етерифікацію жирних кислот та рівні тригліцеридів (A – C) та фосфорилювання ACC та AMPK (D – F) оцінювали, як описано у проекті дослідження та методах. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум шість у трьох примірниках для кожного метаболічного вимірювання. n = мінімум чотири для аналізу ACC та AMPK.
Вплив M1-поляризованих KC на реакцію гепатоцитів на інсулін. Гепатоцити та КС виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як описано у проекті досліджень та методах. Після зазначеного впливу гепатоцити інкубували зі 100 нмоль/л інсуліну протягом 10 хв, готували білкові екстракти та фосфорилювали рецептори інсуліну (ІЧ), фосфорилювали IRS-1, активність PI 3-кінази, пов'язану з IRS-1, та фосфорилювання були оцінені, як описано в проекті та методах дослідження. Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум чотири для кожного експериментального стану.
Експресія TNFα в KC у печінці у відповідь на стандартну дієту чау, жиру та сахарози з високим вмістом жиру та секрецію TNFα з ізольованих M1-поляризованих KC. Самців щурів Wistar піддавали дієті з високим вмістом жиру або сахарози протягом 2 тижнів. Згодом було виділено печінку, підготовлені зрізи та проведено імунофлуоресцентне фарбування для KC та TNFα (A), як описано у дослідженні та методах дослідження. На лівій панелі показані CD68/ED1-позитивні комірки (зелений), на центральній панелі - TNFα-позитивні комірки (червоний), а на правій панелі - об'єднані зображення. На всіх панелях фарбування Хохста використовувалося для візуалізації ядер клітин (синього кольору). n = мінімум три. Для експериментів in vitro (B) гепатоцити та KC виділяли з печінки щурів, висівали та культивували, як показано. Після зазначеної експозиції відбирали середовища, а TNFα визначали кількісно за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА). Дані представлені як середні значення ± SE. Вказано статистичне значення. n = мінімум три в кожній групі. (Якісне цифрове зображення цього показника доступне в Інтернет-випуску.)