ВИЗНАЧЕННЯ СТАТУСА СЕКРЕТОРА

І. ТЕСТ САЛІВА

ПРИНЦИП

Приблизно 80% населення має ген секретора (Se). Ці люди виділяють водорозчинні речовини групи крові у своїй слині та інших рідинах організму. Група А виділяє речовину і невелику кількість Н, група В виділяє речовину В (і Н), група О виділяє лише речовину Н, а група АВ виділяє А, В і невелику кількість Н.

Щоб визначити, чи є людина секретором, слід дотримуватися принципу Пригнічення аглютинації застосовується, коли наявність аглютинації означає негативний тест, і жодна аглютинація не трактується як позитивний результат.

Частина I - Нейтралізація антитіл:

Слину змішують з комерційною антисироваткою (Anti-A, Anti-B або Anti-H) і дають їй можливість короткочасно інкубувати. Якщо пацієнт є секретором, розчинні антигени групи крові в слині реагуватимуть і нейтралізуватимуть антитіла в комерційній антисироватці. Однак необхідно розвести комерційну антисироватку так, щоб її титр антитіл більш відповідав рівню антигену в слині.

Частина II - Інгібування аглютинації:

Коли в досліджувану суміш потім додають комерційні еритроцити відповідної групи крові, не повинно бути вільних антитіл для їх аглютинації, якщо пацієнт є секретором, оскільки антитіла вже реагували з антигенами групи крові в слині. Реакція буде негативною для аглютинації, але трактується як позитивна для секреторного статусу.

Якщо пацієнт несекретор, в слині не буде антигенів групи крові; антитіла в антисироватці не будуть нейтралізовані і будуть вільно реагувати при додаванні тестових клітин. Тому аглютинація є негативним тестом на статус секретора.

РЕАГЕНТИ, ОБЛАДНАННЯ ТА ПРИНАДЛЕЖНІСТЬ

• Очистіть пробірку для збору слини
• 16 пробірок для пірексу розміром 100 мм
• dispo pipets
• кипляча водяна ванна
• 12 х 75 мм трубки
• маркувальна ручка
• Реагент Anti-A, Anti-B або Anti-H, розбавлений, даючи реакцію 2+
• Клітини реагенту A1, B-клітини або O-клітини (скринінгові клітини)
• серофуга
• освітлена аглютинація глядача

ПРОЦЕДУРА

1. Зберіть 2–3 мл слини в чисту пробірку розміром 16 х 100 мм. Для стимуляції виділень використовуйте парафін або чисті гумки - не використовуйте гумку.
2. Помістіть у киплячу водяну ванну на 10 хвилин. Це інактивує ферменти, які в іншому випадку можуть знищити речовини групи крові.
3. Дайте коротко охолонути, а потім перекладіть у трубку розміром 12 х 75 мм.
4. Центрифуга не менше 5 хвилин.
5. Позначте три пробірки розміром 12 х 75 мм:
   

• ТЕСТ
• Б ТЕСТ
• Н ТЕСТ

1. Позначте ще три трубки:

• КОНТРОЛЬ
• Б КОНТРОЛЬ
• H КОНТРОЛЬ
  (Це засоби контролю розведення, щоб переконатися, що антисироватки не розбавляються за межі своєї здатності до аглютинації).

1. Додайте по одній краплі відповідної розведеної антисироватки в кожну пробірку:

• одна крапля розведеного анти-А до тесту А та контролю А
• одна крапля розведеного анти-В до тесту В та контролю В
• одна крапля анти-Н на тест Н та контроль Н

1. У кожну пробірку для тестування додайте одну краплю прозорої слини.
2. У кожну пробірку CONTROL додайте одну краплю сольового розчину.
3. Змішати та інкубувати при кімнатній температурі 10 хвилин.
4. Додайте по одній краплі відповідного реагенту червоних клітин у кожну пробірку:

---