Вплив інгібітора ліпази підшлункової залози та сорбенту ліпідів на холестеринемію та фекальні виділення

Анотація

Вступ

Експериментальний

Тварини та дієти

Було використано двадцять одну самку щурів Вістар, віком приблизно 6 тижнів. Щурів поселяли індивідуально у контрольованому температурою та вологістю віварії (22 ± 1 ° C, відносна вологість 60 ± 5%). Всі дієти доповнювали холестерином при 10 г кг -1 та кокосовим шротом при 124 г кг -1. Кокосова мука, що містить 56,5% жиру, була придбана в магазині здорової їжі.

У таблиці 1 представлений склад контрольної та експериментальної дієт. Дієта для щурів ST-1 поставлена ТОВ «Велаз» (м. Лисолає, Чехія). Через 4 тижні щурів випадковим чином розділили на три групи по 7 щурів у кожній. Дієта № 2 додавали орлістат у кількості 0,3 г кг -1. Дієта № 3 доповнювали амідованим альгінатом по 40 г кг -1 за рахунок целюлози. Дозування орлістату було середнім значенням концентрацій, використаних в експерименті Круз-Хенандеса та співавт. [11]. Дієта та вода були доступні за бажанням. В ході цього експерименту вимірювали початкову та кінцеву ваги тіла. У цьому експерименті середня початкова маса тіла щурів становила 240 ± 28 г. Дослідження було схвалено Комітетом з етики Інституту наук про тварин та Центральною комісією з питань захисту тварин Міністерства сільського господарства Чеської Республіки.

Склад контрольної та експериментальної дієти (г кг -1)

Тривалість експерименту становила 3 тижні, а потім щурів жертвували декапітацією після наркозу шляхом інгаляції ізофлурану (Nicholas Piramal India Ltd., Лондон, Великобританія). Щури отримували 4 г корму за 4 год до їхньої жертви [12].

Матеріали та реактиви

Натрієва сіль альгінової кислоти, продукт низької в'язкості A1112 із бурих водоростей, натрію мануронової кислоти, реагент 1-феніл-3-метил-5-піразолон (ПМП), орлістат, сертифікований еталонний матеріал (PHR 1445), мікрокристалічна целюлоза та N-октадециламін був придбаний у Sigma-Aldrich (Прага). Інші хімікати були придбані у P-Lab (Прага, Чеська Республіка). Натрієву сіль L-гулуронової кислоти було отримано від Carbosynth Ltd., Compton, UK.Набір Sylon HTP (гексаметилдисилазан-триметилхлорсилан-піридин 3: 1: 9) був придбаний у Supelco (Bellefonte, США). Ізолітохолева кислота, норхолева кислота, 12-кетолітохолева кислота, α-, β-, ω-мурихолева кислоти та β-ситостанол були придбані у компанії Steraloids Inc. (Ньюпорт, США). Інші стерини були отримані від Sigma-Aldrich (Прага).

Приготування амідованого альгінату

N-октадециламід альгінової кислоти отримували реакцією метил-естерифікованої альгінової кислоти з реагентом N-октадециламіну [13]. Реакцію з N-октадециламіном проводили в гетерогенних умовах. Продукт промивали підкисленим етанолом, петролейним ефіром, чистим етанолом та ацетоном і, нарешті, сушили на повітрі.

Аналітичні методи

Метод титрування для визначення карбоксильної групи

Вміст усіх карбоксильних груп COOHt (% м/м) в альгіновій кислоті та вміст вільних карбоксильних груп COOHf (% м/м) її метилового ефіру визначали методом титрування [14].

Органічний елементний аналіз та визначення ступеня заміщення

Вміст C, H та N (% м/м) визначали органічним елементним аналізом. Ступінь амідування (DA, мовляв.%) Кінцевих продуктів розраховували згідно з Taubner et al. [13], виходячи із вмісту вуглецю та азоту.

Аналіз молекулярної ваги

Реакція з органічними похідними динітро заснована на здатності зменшувати динітросаліцилову кислоту за рахунок відновлення полісахаридних груп [15]. Для калібрування використовували галактуронову кислоту.

Аналіз співвідношення мануронової та гулуронової кислот в альгінаті

Альгінат гідролізували, як описано Lu et al. [16] з деякими змінами. Дериватизацію уронових кислот проводили, як описано Dai et al. [17]. Та сама процедура застосовувалась для обробки стандартів моносахаридів та їх еквімолярної суміші. Відношення маннуронату до гулуроната розраховували за результатами подальшого аналізу C18 ВЕРХ-DAD (співвідношення площ піків, скориговане на фактори відповіді). Використовували аналітичну колонку C18 ZORBAX (компанія Agilent).

Відбір проб

Зразки змішаної крові відбирали у кожного щура під час забою. Зразкам давали постояти 30 хв. Сироватки відокремлювали центрифугуванням, зберігали в холодильнику та аналізували наступний день. Після лапаротомії печінку вирізали і тримали при -40 ° C до аналізу. Протягом останніх 5 днів цього експерименту фекалії збирали, зважували, об’єднували, заморожували та зберігали до аналізу.

Аналіз ліпідів сироватки, печінки та фекалій

Концентрації холестерину, триацилгліцеринів, білірубіну та активності аспартатамінотрансферази (AST) та аланінамінотрансферази (ALT) у сироватці визначали за допомогою комерційних наборів (BioVendor Ltd., Брно, Чеська Республіка). Загальні печінкові та фекальні ліпіди екстрагували сумішшю хлороформ-метанол та вимірювали гравіметрично [18]. Печінковий холестерин, нейтральні фекальні стерини та жовчні кислоти визначали, як описано раніше [10].