Змішані таблетки α-кетокислоти полегшують хронічне прогресування захворювання нирок через
Анотація
Передумови
Введення кето-аналогів відіграє важливу роль у допоміжній терапії клінічних хронічних захворювань нирок (ХХН), проте попередні дослідження щодо їх ренопротекторного ефекту в основному були зосереджені на патологічних змінах нирок, викликаних нефректомією. Це дослідження було розроблене для вивчення нині недостатньо вивчених альтернативних механізмів, за допомогою яких таблетки α-кетокислоти (КА) впливали на ішемічно-реперфузійну (ІР), спричинену пошкодженням нирок миші, та вивчення поточного стану введення КА щодо запобігання прогресуванню ХХН у хворих на ХХН у Китаї. на різних етапах.
Методи
В експерименті на тваринах проводили ІЧ-операцію для імітації прогресуючої хронічної травми нирок, тоді як КА вводили перорально. Для клінічних досліджень було проведено ретроспективне когортне дослідження, щоб окреслити використання та ефекти КА на ослаблення загострення ХХН. Кінцева точка ХХН визначалась як 50% зниження початкової оціненої швидкості клубочкової фільтрації (eGFR). Для розрахунку кумулятивної ймовірності досягнення кінцевої точки та коефіцієнта ризику погіршення функції нирок були прийняті аналіз Каплана – Мейєра та модель регресії пропорційної ЦОГ.
Результати
У дослідженні на тваринах KA представив захисний ефект на індуковану ІЧ пошкодження нирок та фіброз шляхом послаблення запальної інфільтрації та апоптозу шляхом інгібування ядерних факторів-каппа B (NF-κB) та мітоген-активованих протеїнкіназ (MAPK). У клінічних дослідженнях після коригування основних демографічних факторів у пацієнтів на 4 та 5 стадіях у групі КА спостерігалася значно уповільнена та повільна частота зниження РКФР порівняно з такою у групі No-КА (коефіцієнт ризику (ЧСС) = 0,115, 95% довірчий інтервал (ДІ) 0,021–0,639, стор = 0,0134), демонструючи позитивний ефект КА на зупинку прогресування ХХН.
Висновок
KA покращив індуковану ІЧ хронічну ниркову травму та фіброз і, здавалося, був потенційним захисним фактором у кінцевій стадії ниркової хвороби.
Передумови
Хронічна хвороба нирок (ХХН) стала найважливішим питанням охорони здоров’я через її прогресуючі, незворотні патологічні зміни та ускладнення, включаючи анемію, дисліпідемію та гіперпаратиреоз. Попередні дослідження продемонстрували, що метаболізм білка, який в основному походить від щоденного раціону, бере участь у більшості цих несприятливих патологічних змін [1]. Таким чином, дієтичне втручання з обмеженим споживанням білка було запропоновано як надзвичайно важливу терапевтичну стратегію для затримки прогресуючого зниження функції нирок та розвитку ХХН.
Модель нирково-ішемічно-реперфузійної (ІР) травми надає перевагу спостереження за репарацією нирок після гострої травми нирки, одночасно імітуючи транзиторну ішемію нирки в таких клінічних випадках, як поліорганна недостатність та нирки перед трансплантацією, таким чином пропонуючи уявлення про виживання алотрансплантата після трансплантації нирки [ 15, 16]. Терапія кето-аналогами LPD забезпечує достатнє споживання незамінних амінокислот без відходів білка та надлишкового виробництва та накопичення метаболічного токсину. Подальше розуміння його механізму дії при ХХН було б корисним для розширення сфери застосування.
У цьому дослідженні ми прийняли ІЧ-модель для вивчення молекулярного механізму сполуки таблеток α-кетокислоти (КА) при захворюваннях нирок з кута запалення та апоптозу. Добавки КА гальмували шляхи ядерного фактора-каппа B (NF-κB) та мітоген-активованої протеїнкінази (MAPK), що призводило до полегшення запалення та апоптозу, тим самим забезпечуючи прогресування ХХН. Експеримент на тваринах дав додаткові докази на підтвердження ренозахисних ефектів КА при ХХН, як це бачиться в наших клінічних дослідженнях.
Методи
Тварини
Самці мишей C57BL/6 у віці 2 місяців (вагою 25 г) були придбані у Пекінської лабораторії Huafukang Laboratory Animal Technology Co., Ltd, Пекін, Китай і були акліматизовані протягом 1 тижня. Мишей знеболювали 1% пентобарбіталом натрію (0,01 мл/г, Sigma, США) шляхом внутрішньочеревної ін’єкції. ІЧ-операція: двосторонні нирки мишей були затиснуті через 26 хв (Roboz Surgical Instrument Co, Німеччина). Нирковий кровотік відновлювався через кілька секунд після видалення затискача мишачої артерії. Цілі операції проводили при 36,6 ° C – 37,2 ° C, використовуючи машину для регулювання температури (FHC, США). Тварин поділяли на три групи: Sham, IR + Nacl, IR + KA, n = 4–6/група. Мишам у фіктивній групі зробили ту саму операцію, за винятком затискання ниркових судин. Миші в групі IR + Nacl перенесли ІЧ-операцію і лікували Nacl. Мишей у групі IR + KA оперували за допомогою ІЧ-хірургії та лікували KA (FreseniusKabi, Німеччина). Обидві нирки збирали через 28 днів після ІР-операції. Усі експерименти були схвалені Комітетом з догляду за тваринами та використання лікарні Тунцзи (номер IACUC: S851) та проводились відповідно до керівних принципів NIH.
Підготовка та введення КА та ЛПД
З’єднані α-кетокислотні таблетки конфігували сумішшю 0,375 г α-кетокислоти до 6 мл 0,9% Nacl, до кінцевої концентрації 62,5 мг/мл, і вводили шлунково-сосудисто. Концентрація введення становила 1000 мг на кг ваги миші на день. LPD постачав WQJX BIO-Technology (Ухань, Китай). Дієта складалася з казеїну (6,5%), крохмалю (66,45%), глюкози (10%), соєвої олії (7%), фібрину (5%), мінеральної солі (3,5%), вітаміну (1%), л -цистин (0,3%) та хлорид холіну (0,25%) відповідно до дієти для гризунів Американської дієтологічної асоціації, з калорією 3,5 ккал/г для задоволення енергетичних потреб. У групі IR + KA мишей обробляли KA та LPD. Для порівняння, мишей у групі IR + Nacl обробляли 0,9% Nacl та LPD.
Виявлення BUN, TC і TG
Азот сечовини крові (BUN), загальний холестерин (TC) та тригліцериди (TG) тестували за допомогою наборів (Changchunhuili, Китай) відповідно до інструкцій виробника.
Гістологічне, імуноцитохімічне та імунофлюоресцентне фарбування
Двосторонні нирки мишей фіксували у 4% параформальдегіді та вбудовували у парафін. Вбудовані в парафін нирки були розділені на 3 мкм. Патологічне фарбування для періодичного фарбування кислотою-Шиффом (PAS) та червоного Sirius проводили для оцінки ступеня ураження ниркових канальців та інтерстиціального фіброзу. Для імунофлуоресцентного (IF) фарбування зрізи фарбували первинним антитілом Kim-1 (1: 800; R&D), лектином тетрагонолобуса лотоса (LTL, 1: 100, Vector Lab), альфа-гладком'язовим актином (α-SMA, 1: 100, Abcam), колаген I (1: 100, Abcam), CD45 (1:50, Biolegend), CD3 (1:50, Guge, Wuhan) та Ly6G (1:50, Biolegend) при 4 ° C протягом ночі та флуоресцентний мічені вторинні антитіла. Ядра фарбували 4′-6-діамідино-2-феніліндолом (DAPI). Дані були проаналізовані програмним забезпеченням Image Pro Plus (Media Cybemetics, Роквілл, штат Меріленд, США) сліпо.