3 Побічні продукти з маслами камелії на основі PUFA покращують системний метаболізм та функції клітин селезінки в

Філія INCDBNA-IBNA, Національний інститут досліджень та розробок з біології та харчування тварин, Балотешті, Румунія

Іонелія Тарану,
Михайло Грас,
Пістолет Джини Сесілії,
Моніка Мотіу,
Даніела Є. Марін,
Ніколета Лефтер,
Маріана Ропота,
Михаела Хабеану

Цифри

Анотація

Макухи Camelina отримують після вилучення олії з рослини Camelina sativa. У цьому дослідженні макухи з камелії годували свинями на відгодівлі протягом 33 днів та досліджували його вплив на продуктивність, біохімічні аналіти плазми, про-/протизапальні медіатори та антиоксидантну детоксикаційну захист у селезінці порівняно із соняшниковою мукою. 24 хрестоподібних свиней TOPIG було випадковим чином призначено на одну з двох експериментальних дієтичних процедур, що містять або 12% соняшникової муки (лікування 1-Т1), або 12,0% макухи з камелії, багаті поліненасиченими жирними кислотами ω-3 (ω-3 ПНЖК) ( лікування 2-Т2). Результати не показали впливу дієти Т2 (коржі з камеліни) на споживання корму, середній приріст ваги або ефективність корму. Вживання дієти з камеліни призвело до значного зниження концентрації глюкози в плазмі (18,47%) з тенденцією до зменшення також рівня холестерину в плазмі. У селезінці дієта Т2 модулювала клітинну імунну відповідь, зменшуючи експресію білка та генів прозапальних маркерів, інтерлейкіну 1-бета (IL-1β), фактору некрозу пухлини альфа (TNF-α), інтерлейкіну 6 (IL-6) та інтерлейкін (ІЛ-8) та циклооксигеназа 2 (ЦОГ-2) у порівнянні з дієтою Т1. Навпаки, дієта Т2 збільшилася (Р Таблиця 1. Склад і розрахований вміст поживних речовин у експериментальних дієтах (%).

2. Дієтичний аналіз жирних кислот

На початку експерименту відбирали зразки корму та аналізували склад жирних кислот. Ліпіди екстрагували методом метанол-гексан (ASRO-SR EN ISO 15304/AC, 2005). Зразки аналізували за допомогою газового хроматографа Perkin Elmer (Clarus 500, США), оснащеного інжектором (температура 250 ° C), полум'яно-іонізаційним детектором (температура 260 ° C) та капілярною хроматографічною колонкою BPX70 для метилових ефірів жирних кислот (60 m × 0,25 мм id × 0,20 мкм, Agilent, потік колонки становив 50 мл/хв, а коефіцієнт розщеплення - 1∶100). Програма температур була такою: підвищити від 180 ° C до 220 ° C при 5 ° C/хв і підтримувати протягом 7 хв, потім збільшити до 220 ° C при 5 ° C/хв і підтримувати протягом 10 хв. Загальний час аналізу становив 29 хв. Піки були ідентифіковані шляхом порівняння часу їх утримання з індивідуальним стандартним розчином жирних кислот (метильований 37 компонент FAMWE Mix, SUPELCO, США та соєва олія, SUPELCO, США) (Таблиця 2 та Таблиця 3).

3. Вимірювання біохімічних показників плазми

Концентрація глюкози, загального холестерину, холестерину ліпопротеїнів високої щільності (холестерин ЛПВЩ), тригліцеридів, загального білка, сечовини, Ca, Mg, Fe та активності лужної фосфатази (ALKP), глутамат-піруват-трансамінази (TGP) та глутамат-оксалоацетат-трансамінази (TGO) визначали на автоматичному хімічному аналізаторі BS-130 (Bio-Medical Electronics Co., LTD, Китай), на плазмі крові, зібраної в кінці експерименту, і потім центрифугували протягом 25 хвилин при 3500 × g.

4. Вимірювання загальної кількості підгруп імуноглобулінів у плазмі крові (IgG, IgA, IgM)

Загальну концентрацію підгруп імуноглобуліну (Ig) (G, A та M) вимірювали методом ІФА (Bethyl, Medist, Montgomery, TX, USA) у плазмі крові, після розведення плазми, наступним чином: 1-4000 (IgA), 1 Згідно з інструкціями виробника, 120 000 (IgG) та 1 000 000 (IgM), як повідомлялося раніше [21]. Абсорбцію зчитували при 450 нм за допомогою зчитувача мікропланшетів (Tecan Sunrise, Австрія).

5. Вимірювання антиоксидантної здатності селезінки

Рівень антиоксидантів у тканині селезінки свиней, які годувались на контрольній соняшниковій дієті або на макухах з камеліни, вимірювали за допомогою набору загальної антиоксидантної здатності (TAC) (QuantiChrom - BioAssay Systems, США). Коротко, заморожені зразки тканин селезінки (100 мг) порушували та гомогенізували за допомогою гомогенізатора Ultra-Turrax (IKA-Werke GmbH & Co. KG, Німеччина) та фосфатного буфера, що містить IGEPAL 1%, дезоксихолат натрію 0,5%, SDS 0,1% та повний Таблетки для коктейлю (без ЕДТА) з інгібітором протеази. Гомогенати витримували 30 хв на льоду, а потім центрифугували при 10000 × g при 4 ° С протягом 10 хв. 20 мкл лізату тканини селезінки або стандартного розчину Trolox плюс 100 мкл робочого реагенту додавали до 96-лункової мікропланшету, перемішували відбиванням та інкубували при кімнатній температурі протягом 10 хвилин відповідно до інструкцій виробника. Кінцеву точку поглинання зчитували при 570 нм за допомогою зчитувача мікропланшетів (TECAN, Sunrise, Австрія).

6. Вимірювання вироблення оксиду азоту азоту в селезінці

Рівень оксиду азоту (NO) у селезінці свиней, які годувались на контрольній соняшниковій дієті або на макухах з камеліни, вимірювали для визначення синтезу NO методом Гріса, як описано раніше [22]. Після осадження білка 100 мкл надосадової рідини змішували з рівним об'ємом реагенту Гриса (1% сульфаніламідом, 0,1% нафтилетилендіаміну дигідрохлоридом і 2,5% фосфорною кислотою) та інкубували при 37 ° С протягом 10 хвилин. Поглинання нітриту вимірювали при 550 нм за допомогою зчитувача мікропланшетів (TECAN, Sunrise, Австрія) та стандартної кривої NaNO2 в діапазоні від 0 до 100 мкМ. Концентрацію розраховували на основі діапазону NaNO2, вираженого як мкмоль/л NO2 - .