Абляція Iah1, гена-кандидата для індукованої дієтою жирової печінки, не впливає на ліпіди печінки

Порівну сприяв цій роботі разом з: Томомі Масуя, Міяко Судзукі

Розслідування ролей, написання - оригінальний проект

Афілійована лабораторія харчування тварин, Департамент наук про тварин, Вища школа біоаграрних наук, Університет Нагої, Нагоя, Японія

Порівну сприяв цій роботі разом з: Томомі Масуя, Міяко Судзукі

Ролі Курація даних, розслідування, написання - оригінальний проект

Дослідження ролей, ресурси

Афілійований відділ експериментальних тварин, Центр сприяння медичним дослідженням та освіті, Вища медична школа, Університет Нагої, Нагоя, Японія

Методологія ролей, ресурси

Ролі Курація даних

Нагляд за ролями, написання - огляд та редагування

Ролі Придбання фінансування, розслідування, адміністрування проектів, перевірка, написання - огляд та редагування

Томомі Масуя,
Міяко Судзукі,
Юнько Цудзімура,
Сінсаку Канаморі,
Юкі Міясака,
Таміо Оно,
Ацусі Мурай,
Фуміхіко Хоріо,
Місато Кобаясі

Цифри

Анотація

Цитування: Masuya T, Suzuki M, Tsujimura J, Kanamori S, Miyasaka Y, Ohno T, et al. (2020) Абляція Iah1, гена-кандидата для індукованої дієтою жирової печінки, не впливає на накопичення ліпідів у печінці у мишей. PLoS ONE 15 (5): e0233087. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233087

Редактор: Ерве Гійо, INRA, ФРАНЦІЯ

Отримано: 19 березня 2020 р .; Прийнято: 28 квітня 2020 р .; Опубліковано: 14 травня 2020 р

Наявність даних: Дані мікрочипів зберігаються в омнібусі NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (GSE14750).

Фінансування: Ця робота була підтримана грантом для наукових досліджень (C) (№ 25450166, 18K05532) від Японського товариства сприяння наукам (https://www.jsps.go.jp/), грантом від Меморіального фонду Уехари (https://www.ueharazaidan.or.jp/), грант Японського фонду охорони здоров’я (http://www.jnhf.or.jp/) (МК). Фінансисти не мали жодної ролі у розробці досліджень, зборі та аналізі даних, прийнятті рішення про публікацію чи підготовці рукопису.

Конкуруючі інтереси: Жодна частина цієї роботи, крім реферату, не була опублікована раніше або наразі не розглядається для публікації в іншому місці. Жоден з авторів не має заявляти про конфлікт інтересів.

Вступ

Неалкогольна жирова хвороба печінки (НАЖХП) стосується широкого спектру захворювань печінки, які протікають без надмірного вживання алкоголю, від простого стеатозу до стеатогепатиту, фіброзу та цирозу [1]. Захворюваність на НАЖХП зростає у всьому світі разом із збільшенням поширеності ожиріння, діабету 2 типу та дисліпідемії [2]. Стеатоз печінки спричинений надмірним споживанням енергії та відсутністю фізичних вправ і виникає при порушенні балансу ліпідного обміну в печінці. Однак, оскільки на розвиток НАЖХП впливають не лише фактори навколишнього середовища, такі як дієта та фізичні вправи, а й генетичні фактори, патогенез цієї хвороби до кінця не вивчений.

У цьому дослідженні, щоб дослідити взаємозв'язок між Iah1 та накопиченням ліпідів у печінці, ми створили мишей, що нокаутують Iah1 (KO) з фоном C57BL/6N та A/J-12 SM. Ми також провели аналіз мікрочипів ДНК з використанням епідидимальної жирової тканини мишей A/J-12 SM (WT_A12) та A/J-12 SM Iah1-KO (KO_A12), щоб дослідити вплив дефіциту Iah1 на ліпідний обмін.

Матеріали і методи

Тварини

Всім мишам підтримували температуру 23 ± 2 ° C з 12-годинним циклом світло/темрява (світло ввімкнено з 8:00 до 20:00) та вільним доступом до їжі та води у звичайних умовах у приміщеннях аспірантури біоаграрних наук, Університет Нагої. Мишей відлучували у віці 3 тижнів, а у віці 5 тижнів у них розміщували окремі клітини.

Дієта та графік експериментів

Самців мишей Iah1-дикого типу (WT_B6 або WT_A12) та -KO (KO_B6 або KO_A12) мишей годували стандартним чау, CE-2 (CLEA Japan, Inc., Японія), до 6-тижневого віку. Згодом усіх мишей годували дієтою з високим вмістом жиру (D07053003; Research Diets, Нью-Брансвік, Нью-Джерсі, США) у віці від 6 до 18 тижнів (протягом 12 тижнів). Склад дієти з високим вмістом жиру був описаний раніше [7]. Коротко кажучи, дієта з високим вмістом жиру включає сало (30% мас.) Та казеїн (20,9% мас.). Вагу тіла вимірювали щотижня протягом експериментального періоду (віком 6–18 тижнів). У віці 18 тижнів проби крові відбирали з орбітальних вен через 4 год голодування (з 9:00 до 13:00). Потім мишей приносили в жертву шляхом вивиху шийки матки. Тканини (печінка, нирки, легені, коричнева жирова тканина, епідидимальний жир, підшкірний жир, брижовий жир та заочеревинний жир) збирали, зважували та негайно заморожували за допомогою рідкого азоту.

Це дослідження було проведено відповідно до Положення про експерименти на тваринах Нагойського університету. Усі процедури та догляд за тваринами були затверджені Комітетом з експериментів з тваринами, Вищою школою біоаграрних наук Університету Нагої (затвердження № 201622604, 2017030219, 2018031316).

Аналіз послідовності ДНК

Ген Iah1 та гени-кандидати мишей KO_A12 ампліфікували за допомогою ПЛР, а продукти ПЛР очищали за допомогою набору ExoSAP-IT (Affymetrix). Праймери, що використовуються для аналізу послідовності нецільових ефектів, наведені в таблиці S2. Очищені продукти ПЛР маркували за допомогою набору для послідовного циклу BigDye Terminator v3.1, а мічену ДНК очищали осадженням етанолом. Потім осад розчиняли у Hi-Di формаміді (Applied Biosystems). Послідовності ДНК визначали за допомогою генетичного аналізатора Applied Biosystem 3130/3130xl (Applied Biosystems).