Дієти, багаті холестерином або жирами, прискорюють природний спад віку щодо нейрогенезу гіпокампа дорослих та
Усі процедури, що стосуються суб'єктів тварин, проводились згідно з інституційними правилами CINVESTAV-IPN, що керуються доглядом та використанням лабораторних тварин. Схвалення протоколу було отримано від Інституційного комітету з догляду та використання тварин (номер протоколу 0081-14). Для проведення дослідження на початку експерименту було використано 25 самок 5-місячних щурів Вістар. Щурів отримували з Інституційного фонду тварин (IAF) та розподіляли у 3 групи. Тварин утримували в умовах контрольованого освітлення, повітря та вологості та отримували їжу та воду за бажанням. Щурів випадковим чином розподіляли до експериментальних груп наступним чином: контрольна дієта (n = 8), дієта з жирними кислотами (n = 8), збагачена холестерином дієта (n = 9). Тварин годували до 10 тижнів різними дієтами, компоненти яких описані в таблиці 1. Масу тіла реєстрували щотижня. Всі інституційні та міжнародні норми були дотримані, щоб уникнути страждань тварин та зменшити кількість тварин, зайнятих у дослідженні.
2.2. Зразки крові та профіль ліпідів
На 0 тижні всіх тварин відвезли до приміщення для експериментів і знеболили 5% ізофлураном для індукції та 3% для утримання в наркозній камері (Vetequip Impac6). Як тільки тварини відчували себе під впливом анестезії, низькі лапи голили, а кров збирали канюлею із стегнової вени. Зразки крові зберігали в пробірці Еппендорфа з гепарином і зберігали при кімнатній температурі. Після цієї процедури тварин повертали в домашні клітини, зразки крові центрифугували та збирали плазму для подальшого аналізу. Досліджуваними параметрами були: загальний холестерин, тригліцериди, ліпіди високої щільності (ЛПВЩ) та ліпіди низької щільності (ЛПНЩ). Зразки були направлені в клінічну ветеринарну лабораторію для їх аналізу. Тварини мали 24 години голодування перед забором зразків крові, щоб уникнути негайних наслідків дієти.
Таблиця 1. Харчовий склад гранул.
2.3. Ін’єкції BrdU
До 6-го тижня лікування тварини отримували разову дозу 5-бром-2'дезоксиуридину (BrdU) (50 мг/кг ваги тіла, B5002_SIGMA) з метою мічення проліферуючих клітин в зубовидному звивистому відділі гіпокампа.
2.4. Підвищений плюс лабіринт
Для того, щоб проаналізувати можливу емоційну модуляцію, спричинену дієтою, щурів тестували за допомогою тесту на підвищений плюс лабіринт (EPM) до 3-го тижня після ін'єкції BrdU. Це широко використовуваний тест на тривожність, який досліджує поведінку філогенетично обумовлену. Він використовує природну огиду щурів до відкритих/високих просторів і перевіряє, як тварини можуть впоратися зі стресовим рівнем [20]. Тест проводили, як повідомляли Leal-Galicia et al., [15]. Апарат являє собою підняту поверхню з хрестоподібною формою, де два плечі закриті стінами, а два відкриті. Тварина поміщається в центр хреста обличчям до закритої руки і залишається там для вільного дослідження протягом 300 сек. Тварини з низькою тривожністю проводять більше часу на розпростертих обіймах. Вимірювали кількість переходів між відкритими та закритими руками, а також час, витрачений на вивчення розкритих рук.