Frontiers - Метаболічний погляд на нейропротекторний ефект відвару Джин-Май-Тонг (JMT) на

Етнофармакологія

Редаговано
Джордж К. Лі

Західно-Сіднейський університет, Австралія

Переглянуто
Шуай Джи

Медичний університет Сюйчжоу, Китай

Суреш К. Моханкумар

JSS Pharmacy College, Індія

Приналежності редактора та рецензентів є останніми, наданими в їхніх дослідницьких профілях Loop, і вони не можуть відображати їх ситуацію на момент огляду.

метаболічний

  • Завантажити статтю
    • Завантажте PDF
    • ReadCube
    • EPUB
    • XML (NLM)
    • Додаткові
      Матеріал
  • Експортне посилання
    • EndNote
    • Довідковий менеджер
    • Простий текстовий файл
    • BibTex
ПОДІЛИТИСЯ НА

СТАТТЯ Оригінального дослідження

  • 1 кафедра традиційної китайської медицини, лікарня Пекінського союзу медичного коледжу, Медичний коледж Пекінського союзу, Китайська академія медичних наук, Пекін, Китай
  • 2 Медичний дослідницький центр, лікарня Пекінського союзу медичного коледжу, Медичний коледж Пекінського союзу, Китайська академія медичних наук, Пекін, Китай

Відвар Jin-Mai-Tong (JMT) - традиційний китайський складний рецепт для лікування діабетичної периферичної нейропатії (ДПН). Метою цього дослідження є дослідити нейропротекторну дію відвару JMT на діабетичних щурів з периферичною нейропатією та з'ясувати потенційний механізм, заснований на підході метаболоміки. Щурів Sprague-Dawley (SD) випадковим чином розподіляли на чотири групи: контрольну групу, модельну групу, спричинену стрептозотоцином (STZ), групу, яка отримувала JMT з низькими дозами (JMT-L), та групу, яка отримувала високі дози JMT (JMT-H). Після 12 тижнів лікування оцінювали поведінкові зміни, невелику втрату клітковини та гістопатологічні пошкодження сідничного нерва. Зразки сироватки збирали для нецільового аналізу метаболоміки на основі UPLC/QTOF-MS та багатовимірної статистики. Як результат, лікування JMT у двох дозах (13,9 та 27,8 г/кг⋅д), очевидно, покращило механічний поріг болю ( 1. Номер партії та інша детальна інформація щодо кожного лікарського засобу були наведені в додатковій таблиці S1 та на додатковій малюнку S1. Зразки ваучерів були здані на зберігання у відділ традиційної китайської медицини лікарні Пекінського союзу медичного коледжу, Пекін, Китай.

Для приготування відвару JMT змішані неочищені препарати замочували стильованою водою кімнатної температури (25 ° C) на 2 години. Для першого відвару ліки кип'ятили із зворотним холодильником у 10-кратному розмірі води (1:10, w/v) протягом 1,5 год перед фільтруванням. Для другого відвару залишки ліків кип'ятили із зворотним холодильником у восьмикратному обсязі води (1: 8, w/v) перед фільтруванням. Потім два відвари змішували між собою та концентрували у вакуумі. Концентрований відвар сушили ліофілізацією з виходом екстракції 19%. Потім екстракт JMT зберігали при -80 ° C і добре суспендували у воді перед використанням.

Хімічний аналіз відвару JMT

Тварини та лікування

Щурам групи STZ + JMT-L та групи STZ + JMT-H перорально вводили відвар JMT у дозі 13,9 г/кг (що дорівнює клінічній дозі, розрахованій за масою сирих препаратів) та 27,8 г/кг, відповідно, один раз на день і протягом 12 тижнів поспіль після встановлення моделі діабету. Щурам у групі STZ та контрольній групі вводили однаковий обсяг дистильованої води (5 мл) один раз на день. Вагу тіла та рівень глюкози в крові кінчика хвоста у всіх щурів вимірювали кожні 4 тижні.

Фон Фрей Сенсорне тестування

Після 12 тижнів лікування оцінювали механічну чутливість до шкідливих подразників за допомогою естезіометра приладу вимірювання болю фон Фрея (IITC Life Science Inc., Woodland Hills, CA, США) (Choi et al., 2014; Yerra et al., 2018). Як було описано раніше, після того, як щури адаптували навколишнє середовище, задня лапа стимулювалася зондом інструменту Фон Фрея (Song et al., 2019). Механічний больовий поріг вимірювали як силу, при якій спостерігали відведення лапи і реєстрували в грамах. Кожного щура вимірювали 3 рази на двосторонніх задніх лапах з інтервалом у 5 хвилин між послідовними подразниками. Механічний больовий поріг щурів розглядався як середнє вимірювання.

Спостереження за морфологічними змінами в сідничному нерві

В кінці експерименту всіх щурів жертвували внутрішньочеревно ін'єкцією 10% хлоралгідрату (3 мл/кг) для глибокої анестезії. Після забору крові лівий сідничний нерв (2–3 мм) був виділений та зафіксований у 4% параформальдегіді (PFA) при 4 ° C протягом ночі. Сідничний нерв був вбудований у парафін і вирізав як поперечний, так і поздовжній розріз (4 мкм). Звичайна гістопатологічна процедура проводилася для фарбування гематоксиліну та еозину (H&E) для спостереження за патологічними структурними змінами, а зображення були отримані Aperio CS2 (Leica Biosystems, Річмонд, Іллінойс, США).

Внутрішньоепідермальний та субепідермальний нервовий профіль

Приготування зразка сироватки

В кінці експерименту всіх щурів голодували протягом 12 год (вільно пити воду), а потім жертвували для збору сироватки під наркозом. Кров відбирали з черевної аорти. Кожен зразок витримували при 4 ° С протягом 4 год, центрифугували при 3000 об/хв протягом 10 хв, і супернатант збирали і зберігали при -80 ° С до метаболічного аналізу. Перед аналізом кожен зразок сироватки розморожували при 4 ° С, а аликвоту по 100 мкл переносили в стерильну силіконізовану пробірку Еппендорфа об'ємом 1,5 мл. Після обробки 300 мкл холодного метанолу суміш вирвали протягом 30 с, а потім витримували при 4 ° С протягом 1 год для осадження білка. Після центрифугування при 13000 g протягом 10 хв супернатант потім збирали та фільтрували через мембрану 0,22 мкм перед аналізом UPLC/Q-TOF MS. Зразок контролю якості (QC) готували шляхом змішування рівного обсягу (50 мкл) кожного тестового зразка. Зразок QC вводили 6 разів на початку циклу, щоб забезпечити рівновагу системи UPLC/Q-TOF MS, а потім між кожними 6 зразками серед циклу, щоб забезпечити узгодженість аналізу.