Гепатоцелюлярне човгання та рециркуляція сорафенібу-глюкуроніду залежить від Abcc2, Abcc3,

Знайдіть цього автора на Google Scholar
Знайдіть цього автора на PubMed
Шукайте цього автора на цьому сайті
Для листування: [email protected]

Анотація

Вступ

У цьому дослідженні ми мали на меті зрозуміти процеси, що лежать в основі солювання глюкуроніду гепатоцитів сорафенібу, виведення жовчі та рециркуляцію кишечника за допомогою моделей in vitro та in vivo, а отже, з’ясувати механізми, що сприяють міжіндивідуальній фармакокінетичній мінливості сорафенібу.

Матеріали і методи

Везикулярний транспорт in vitro

Везикули з клітин Sf9 (Life Technologies), що експресують миші Abcc2 (mAbcc2), щури Abcc2 (rAbcc2), людини ABCC2 (ABCC2), людини ABCC3 (ABCC3) або людини ABCC4 (ABCC4), інкубували з сорафенібом (10 мкмоль/л; Хемі) Tek) або SG (10 мкмоль/л) протягом 5 хвилин у присутності або відсутності АТФ (4 ммоль/л) або рифампініну (100 мкмоль/л), потім лізують з 0,1 моль/л HCl і аналізують за допомогою рідинної хроматографії. тандемна мас-спектрометрія (LC/MS-MS; посилання 20). АТФ-залежний транспорт сорафенібу та СГ визначали шляхом віднімання АМФ-залежного транспорту від АТФ-залежного транспорту, причому обидва виражалися в пмоль/хв/мг, після нормалізації для неспецифічного транспорту, який спостерігався у контрольних везикулах. Експерименти з поглинанням проводили при концентрації 10 мкмоль/л, що еквівалентно середнім концентраціям сорафенібу в стаціонарному стані, досяжних у дорослих та дітей, які отримували 400 мг або 200 мг/м 2 двічі на день (9, 21).

Тварини

Мишей Abcc4 -/- на фоні C57BL/6 генерували та вирощували власними силами в Дитячій дослідницькій лікарні Сент-Джуд (Мемфіс, Теннессі), а мишей Abcc2 -/- на фоні FVB надавав Taconic. Усі інші нокаут-штами на тлі FVB були створені та вирощені в Інституті раку Нідерландів (Амстердам, Нідерланди). Аналіз ПЛР у режимі реального часу продемонстрував, що експресія відповідних транспортерів лікарських засобів суттєво не змінилася в жодному з цих нокаутних штамів (Додаткова таблиця S1). Тому була виключена можливість серйозних компенсаторних змін у експресії транспортера, що впливають на інтерпретацію результатів. Abcc2 -/- щури на фоні Спрег-Доулі були отримані від Sage Labs. Мишей і щурів утримували в середовищі з контрольованою температурою з 12-годинним світловим циклом і отримували стандартну дієту та воду за бажанням. Експерименти були схвалені інституційними комітетами з догляду та використання тварин Дитячої дослідницької лікарні Сент-Джуд та Нідерландського інституту раку.

Фармакокінетичні дослідження плазми

Фармакокінетика сорафенібу та SG у мишей дикого типу та Abcc2 -/-. Профілі концентрації плазми у часі (A та D) та співвідношення печінки до плазми (B та E) сорафенібу та SG відповідно у самок мишей дикого типу та Abcc2 -/-. Сорафеніб призначали перорально у дозі 10 мг/кг. Печінку брали через 2 та 7,5 години після введення сорафенібу (n = 4 на групу). Концентрації в печінці (CL) нормалізували до відповідних концентрацій у плазмі (Cp). C та F, співвідношення концентрації сорафенібу та SG у жовчі до плазми крові у мишей дикого типу та Abcc2 -/-. Сорафеніб (10 мг/кг) вводили перорально за 30 хвилин до початку збору жовчі (N = 3 дикого типу; N = 2 миші Abcc2 -/-). Жовч збирали протягом 2 годин. Дані представляють середнє значення ± SE.

ABCC2 опосередковує жовчовиділення SG

Щоб визначити, чи спостерігаються ці фенотипи також у інших видів, фармакокінетику сорафенібу оцінювали у щурів дикого типу та Abcc2 -/-. Дефіцит Abcc2 у щурів призвів приблизно до 2-кратного збільшення рівня плазми як сорафенібу (рис. 3А), так і сорафенібу-N-оксиду (рис. 3Б). Однак несподівано SG не виявлено в плазмі або жовчі ні щурів дикого типу, ні щурів Abcc2 -/- (рис. 3C). Дослідження метаболізму ex vivo показали, що порівняно з мишами та людьми (9) мікросомам печінки щурів не вистачає значної здатності утворювати СГ (рис. 3D). Ці результати вказують на те, що щур є неадекватною моделлю для фармакокінетики сорафенібу у людини. Більше того, участь ABCC2 у транспорті незміненого сорафенібу може набувати дедалі більшого значення, коли глюкуронізація дефектна, що відповідає останнім клінічним даним (10). У сукупності дані вказують на те, що жовчовиділення СГ в основному опосередковується ABCC2 і тому є важливим фактором, що визначає фармакокінетику СГ.

На синусоїдальний транспорт СГ впливає дефіцит Abcc2 та Abcc3

Потім розподіл сорафенібу оцінювали у мишей Oatp1a/1b; Abcc2 -/- та Oatp1a/1b; Abcc2; Abcc3 -/-. Відповідно до наших висновків на одиничних мишах Abcc2 -/- ми виявили, що делеція Abcc2 у поєднанні з делецією Oatp1a/1b призвела до дуже великого збільшення плазмової експозиції SG порівняно з мишами дикого типу (у 909 разів), але також порівняно з мишами Oatp1a/1b -/- (12,7-кратні; рис. 4D; Додаткова таблиця S2). Через 2 години рівень SG в печінці був у 1,8 рази вищим у мишей Oatp1a/1b; Abcc2 -/- порівняно з мишами дикого типу (рис. 4Е). В результаті сильно підвищеного рівня SG в плазмі крові співвідношення печінки до плазми зменшилось у всіх нокаутованих мишей-транспортерів порівняно з мишами дикого типу (рис. 4F). Ці висновки підтверджують важливу роль Abcc2 у жовчовиділенні SG, і що видалення Abcc2 на додаток до дефіциту Oatp1a/1b призводить до значного збільшення синусоїдальної екструзії цього метаболіту назад у кровообіг.