Кверцетин полегшує генералізовану гіпералгезію у мишей з індукованим аденоміозом

Джичан Ні

Кафедра гінекології, акушерства та гінекології лікарні Університету Фудана, Університет Фудань, Шанхай 200011, Китай

Сісі Лю

Анотація

Вступ

Аденоміоз - це поширений гінекологічний розлад, що характеризується гетеротопічними залозами ендометрія та стромою в міометрії. Він часто вражає жінок у віці 30–50 років (1) і часто викликає дисменорею, менорагію, метрорагію, дифузно збільшену матку та диспареунію, а також безпліддя (2,3). Проте точні механізми болю, викликаного аденоміозом, досі невідомі. Тому лікування аденоміозу є основною проблемою. В даний час хірургічна та медична терапія є загальним методом лікування аденоміозу. При важкому симптоматичному аденоміозі методом гістеректомії є спосіб лікування (4), який може бути травматичним для жінок, які бажають завагітніти. Отже, медичні методи лікування, такі як даназол та агоніст голідотропін-рилізинг-гормону, важливі для пацієнтів, які прагнуть завагітніти. Однак дані показали, що існує кілька обмежень цих методів лікування, включаючи тривалий період лікування, важкі побічні явища та часті рецидиви (5). Тому необхідні подальші дослідження щодо розробки більш ефективної медичної терапії.

Кверцетин (3,3 ′, 4 ′, 5,7-пентагідроксифлавон; молекулярна маса, 302 г/моль), біоактивний флавоноїд широко присутній у різних фруктах та овочах, включаючи цибулю, а найбільш вивченими первинними джерелами кверцетину є брокколі, яблука, ягідні культури та виноград, а також в деяких травах, чаї та вині (6,7). Нові докази продемонстрували, що кверцетин має потенційні переваги для лікування раку та ендометріозу без явних побічних ефектів, має антиканцерогенну, протизапальну, противірусну, антиоксидантну та психостимулюючу активність, а також здатність інгібувати перекисне окислення ліпідів., агрегацію тромбоцитів та проникність капілярів, а також для стимулювання біогенезу мітохондрій (8,9). Однак основний механізм кверцетину, що полегшує генералізовану гіпералгезію аденоміозу, залишається недостатньо вивченим. Тому необхідні добре розроблені випробування для оцінки впливу кверцетину на аденоміоз.

Завдання цього дослідження - оцінити вплив кверцетину на мишей з аденоміозом у контрольних регіонах відбиття (ICR). Вона мала на меті дослідити, чи покращує лікування кверцетином біль і придушує інфільтрацію міометрія ендометріальними імплантатами. Ми припустили, що кверцетин може зменшити гіпералгезію, а також придушити інфільтрацію міометрієм ектопічного ендометрію у мишей з індукованим аденоміозом. Для з'ясування молекулярного механізму лікування кверцетином, рівні деяких важливих медіаторів болю, включаючи транзиторний потенціал рецептора катіонного каналу підродини V член 1 (Trpv-1), фосфо (p) -p38 мітоген-активованої протеїнкінази (MAPK) та р-позаклітинну регульовану сигналом кіназу (ERK). Наше попереднє дослідження продемонструвало, що вальпроєва кислота (VPA), інгібітор гістондеацетилази, покращує генералізовану гіпералгезію та зменшує інфільтрацію міометрія (10). Тому VPA використовували як позитивний показник у цьому дослідженні.

Матеріали і методи

Хімікати

Кверцетин та VPA (натрієва сіль VPA, кат. № P4543) були придбані у Sigma-Aldrich (Merck KGaA, Дармштадт, Німеччина). Всі ці препарати розчиняли у 2% диметилсульфоксиді в 0,1 М Na2SO4, доведені до рН 5,0. Тамоксифен цитрат був придбаний у фармацевтичної компанії Fudan Forward (Шанхай, Китай).

Тварини та лікування

Новонароджених мишей ICR (1 день після народження; n = 43) та їх мишей, що народилися (n = 10) було придбано у Shanghai Laboratory Animal Corporation (Шанхай, Китай). Кожна миша-мати та її потомство були поміщені в одну клітку в контрольованих умовах (

20 ° C, цикл 12:12 світло/темно) і мав вільний доступ до їжі та прісної води.

Відповідно до протоколу Green et al (11) та Parrott et al (12), самкам новонароджених мишей перорально вводили 1 мг/кг тамоксифену, суспендованого в суміші арахісової олії/лецитину/згущеного молока (2: 0,2: 3, за обсягом) об'єм дози 5 мкл/г маси тіла з 2 по 5 день після народження. Жіночих контрольних мишей-новонароджених (n = 9), позначених випадковим чином, годували еквівалентною кількістю розчинника без тамоксифену. Коли мишам виповнилося 3 тижні, їх відлучали від грудей і відділяли від своїх матерів, а самки мишей продовжували в рамках дослідження.

Усі експерименти проводились згідно з керівництвом Керівництва Національної дослідницької ради з догляду та використання лабораторних тварин (13) та затверджено інституційною комісією з огляду експериментальних тварин Шанхайської лікарні акушерства та гінекології Університету Фудань (Шанхай, Китай).

Протокол експерименту

Неонатальним мишам дозували тамоксифен, як описано (n = 34), і 9 контрольним мишам дозували лише розчинник. Починаючи з 4 тижнів після народження, тест на конфорку вводили всім мишам кожні 4 тижні, також вимірювали і реєстрували масу їх тіла. Через 16 тижнів після народження всіх мишей, яким дозували тамоксифен, було випадковим чином розділено на 4 групи, кожна з яких отримувала певне лікування щоденним внутрішньошлунковим введенням протягом 3 тижнів наступним чином: Група L (n = 9) отримувала низькі дози (25 мг/кг маса тіла) лікування кверцетином; Група Н (n = 9) отримувала лікування кверцетином у високих дозах (50 мг/кг маси тіла); Група V (n = 8) отримувала лікування VPA (160 мг/кг маси тіла); Група U (n = 8) або необроблена група отримали лише транспортний засіб. Групу мишей (n = 9), яким неонатально вводили лише розчинник, позначали як групу С, не отримували жодної обробки і служили пустим контролем. Дози цих препаратів визначали на підставі наших попередніх досліджень та інших досліджень (10,14–18).

Після 3-тижневого лікування наркотиками було проведено остаточне тестування конфорки для всіх мишей з індукованим аденоміозом, а також була зареєстрована маса тіла. Всім мишам знеболювали і перфузували через висхідну аорту теплий (37 ° С) фізіологічний розчин, а потім теплий розчин, що складається з 4% параформальдегіду і 0,2% пікринової кислоти в 0,1 М фосфатному буфері. Потім після перфузії негайно слідував той самий фіксатор (4 ° C). Потім матки вирізали і фіксували на ніч при кімнатній температурі в тому ж фіксуючому розчині, потім вносили у парафін для гістопатологічного дослідження та імуногістохімічного аналізу. Ганглії дорсальних коренів L6 та S1 (DRGs) розсікали, і тканини після цього фіксували в тому ж фіксаторі на 90 хв при 4 ° C, а потім занурювали в 10% сахарозу в 0,1 М фосфатний буфер на ніч.