П’єн Цзе Хуан полегшує запалення суглобів у мишей, викликаних артритом, що викликаються колагеном, китайська медицина
Анотація
Передумови
Ревматоїдний артрит (РА) - це аутоімунне захворювання, що характеризується синовітом. Pien Tze Huang (PZH) - китайський патентний препарат із протизапальною та імуномодулюючою дією. Однак чи можна використовувати PZH у терапії РА, досі невідомо. Тому це дослідження мало на меті вивчити терапевтичний ефект та потенційний механізм PZH на мишей, викликаних колагеном (CIA).
Методи
Самців мишей DBA/1J використовували для встановлення тваринної моделі ЦРУ, а потім обробляли різними дозами PZH протягом 4 тижнів. Терапевтичний ефект PZH на мишей CIA оцінювали за шкалою артриту, патологічним фарбуванням та виявленням рівня запальних факторів у сироватці крові та суглобах. Щоб дослідити його можливий механізм, були виявлені активність сигнального шляху NF-κB, запалення NLRP3 та рівень A20.
Результати
Результати показали, що PZH може полегшити еритему та набряк задніх лап мишей CIA, поліпшити патологічний стан суглобів та зменшити продукцію IL-1β, IL-6 та IL-17 у сироватці та суглобах. Крім того, PZH може суттєво пригнічувати активність сигнального шляху NF-κB та запалення NLRP3 у гомілковостопному суглобі мишей CIA порівняно з модельною групою. Це також підвищило рівень A20 у гомілковостопному суглобі мишей ЦРУ.
Висновок
Це дослідження показало, що PZH може полегшити суглобове запалення мишей ЦІУ, і механізм може бути пов'язаний з регуляцією сигнального шляху NF-κB та запаленням NLRP3.
Передумови
Ревматоїдний артрит (РА) - це запальне захворювання, яке характеризується великою синовіальною гіперплазією та запальною інфільтрацією клітин, що остаточно спричиняє пошкодження кісток та функціональну недостатність суглобів [1]. Прозапальні цитокіни, такі як IL-1β, IL-6 та IL-17, що продукуються синовіоцитами та інфільтруючими імунними клітинами, тісно пов'язані з патогенезом РА [2]. Вони можуть активувати інші медіатори запалення, такі як INF-γ, iNOS та COX-2, посилюючи синергічне запалення синовіальної тканини, що в кінцевому підсумку призводить до пошкодження суглобів [3]. Доведено, що багато сигнальних шляхів беруть участь у регулюванні продукції прозапальних цитокінів у РА. Окрім класичного сигнального шляху NF-κB, поступово викликає занепокоєння інфламасома 3, що містить NOD-подібний рецептор піринового домену, що містить 3 (NLRP3) при патологічному розвитку [4, 5]. Активація запального процесу NLRP3 впливала не тільки на експресію IL-1β та IL-18, але й на активацію сигнального шляху NF-κB [6, 7]. Передача цих запальних сигналів також свідчила про складність патологічного процесу РА.
Клінічні препарати від РА включають нестероїдні протизапальні засоби (НПЗЗ), глюкокортикоїди та кілька біологічних засобів, що мають різну ступінь ефективності та побічні ефекти [8]. Тому безпечні та ефективні препарати все ще терміново необхідні при лікуванні РА. Традиційні китайські ліки (ТКМ) - це скарбниця для відкриття нових наркотиків. Деякі ТКМ використовувались для лікування пацієнтів з РА у клініці з хорошою ефективністю, такі як відвар Ву-Тоу та таблетки І Шень Хуан Бі [9, 10].
Pien Tze Huang (PZH), відома традиційна китайська формула, складається з Notoginseng Radix et Rhizoma (Тяньці або Санькі), числення бовіс (Жовчний камінь Ніухуан або бик), Шедан (зміїний жовч) і мускус [11]. Він використовується у Китаї та Південно-Східній Азії протягом століть як народний засіб від різних захворювань, пов’язаних із запаленнями, таких як гепатит. Було доведено, що PZH чинить протизапальну дію, регулюючи відсоток клітин Th1 і Th17, зменшуючи експресію IL-17, IL-23 та IFN-γ та регулюючи сигнальні шляхи NF-κB та STAT у тварин із запальною моделлю [11, 12]. Останнім часом деякі лікарські компоненти Notoginseng Radix et Rhizoma повідомлялося, що вони мали значний ефект при лікуванні мишей або щурів з колаген-індукованим артритом (ЦРУ), класичною моделлю для тварин з РА [13, 14]. Крім того, гінзенозид Rg1 та сполука метаболіту гінзенозиду К можуть помітно регулювати NLRP3-запалення та ядерну транслокацію NF-κB [14, 15]. На підставі цих досліджень ми припустили, що PZH може мати терапевтичний ефект на мишей ЦРУ. Отже, це дослідження мало на меті вивчити терапевтичний потенціал та можливий механізм PZH на мишах ЦРУ.
Методи
Наркотики
PZH виробляється Zhangzhou Pien Tze Huang Pharmaceutical Co., Ltd., (Чжанчжоу, Китай; затвердження FDA No Z35020243). Зразки лікарських засобів були ідентифіковані та охарактеризовані методом ВЕРХ – МС/TOF як наша попередня публікація [12]. Вихідний розчин PZH готували шляхом розчинення порошку PZH у очищеній воді і зразок знову повністю перемішували перед використанням.
Тварини
Самців мишей DBA/1J віком 6–8 тижнів отримували у Пекінських лабораторіях Vital River (Пекін, Китай). Мишей годували їжею та водою ad libitum, а потім їм давали можливість акліматизуватися протягом 1 тижня до початку експерименту. Всі використані тут протоколи отримали схвалення від Комітету з етики досліджень Інституту основної теорії китайської медицини Китайської академії китайських медичних наук.
Індукція ЦРУ
Бичачий колаген типу II (CII, 2 мг/мл; Chondrex, Редмонд, Вашингтон, США) розводили в рівному обсязі повного ад'юванта Фрейнда (Chondrex). Мишей спочатку імунізували 100 мкл емульсії, що містить 100 мкг CII, шляхом внутрішньошкірного введення в хвіст, а потім 21-го дня прискореною імунізацією [16]. Початок ЦРУ можна спостерігати між 28-м та 32-м днем після першої імунізації.
Лікування
Ми розділили мишей успішної індукції моделі CIA на шість груп (по шість мишей на групу), які були нормальною групою, модельною групою, групою низьких доз PZH (PZH-L, 0,078 г/кг/день), групою середньої дози PZH ( PZH-M, 0,234 г/кг/день, що дорівнює клінічній дозі), група високих доз PZH (PZH-H, 0,702 г/кг/день) та група метотрексату (MTX, 0,3 мг/кг/день, встановлена як описаний раніше [17]). Очищену воду (нормальна група, модельна група), MTX та PZH вводили внутрішньошлунково щодня в обсязі 1 мл/100 г протягом 4 тижнів.
Оцінка артриту
Оцінку артриту вимірювали двічі на тиждень. Оцінку артриту для кожного гомілковостопного суглоба реєстрували ті самі спостерігачі, які були сліпими щодо лікування тварин, як описано раніше. Підрахунок проводився за шкалою 0–4, оцінки артриту виконувались як: 0 = відсутність змін; 1 = лапа з легким набряком на одній кінцівці; 2 = більше однієї лапи з набряком; 3 = вся лапа з набряком і явною еритемою; і 4 = ціла лапа з сильним набряком. Максимальний бал кожної миші становив 16 [18].
ІФА
Зразки готували з мишей сироватки. Рівні IL-1β, IL-6 та IL-17 у сироватці мишей визначали методом ІФА з використанням комерційних наборів (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) згідно з протоколом виробника.
Біохімічне визначення крові
Аланінамінотрансфераза (ALT), аспартатамінотрансфераза (AST), креатинін (CREA) та сечовина (UREA) у сироватці мишей тестувались на біохімічних комерційних наборах крові за допомогою японського автоматичного біохімічного аналізатора Hitachi 7160.
Гістопатологія
Зрізи (3 мкм) готували і фарбували гематоксиліном та еозином (H&E). Гістопатологічні характеристики оцінювали та оцінювали за сліпих умов за такою системою: 0, відсутність змін; 1, незначний вогнищевий інфільтрат; 2, помірний інфільтрат; 3, важкий інфільтрат, але відсутність пануса або ерозії хряща; і 4, дуже важкий інфільтрат, плюс ерозія пануса або хряща та фіброз [19]. Оцінка була проведена сліпо трьома незалежними спостерігачами.