Під шкірою іксодові кліщі в підшкірній клітковині рудих лисиць (Vulpes vulpes) з Німеччини
Анотація
Передумови
Іксоди spp. є переносниками зоонозних збудників. Всі три активні стадії життя (личинки, німфи, дорослі особини) повинні живитись господарем для розвитку. Зазвичай кліщі паразитують, прикріплені до зовнішньої поверхні шкіри господаря. Цікаво, що в деяких випадках кліщі також можуть бути виявлені в підшкірній клітковині у різних господарів, таких як руді лисиці (Vulpes vulpes), єнотовидні собаки (Nyctereutes procyonoides) та собак.
Методи
Вісцеральний бік 126 рудих лисиць з Німеччини оглядали візуально в пошуках кліщів. Локалізація кліщів була зафіксована і призначена для десяти конкретних частин тіла. Морфологічна ідентифікація кліщів проводилась згідно стандартизованих таксономічних протоколів. Кліщів, яких неможливо було ідентифікувати далі, досліджували генетично через звичайна ПЛР, націлена на 16S рРНК і кокс1 ген. Для гістопатологічного дослідження застосовували фарбування гематоксиліном та еозином (H&E).
Результати
У 111 із 126 (88,1%) обстежених шарів принаймні один кліщ був виявлений у підшкірній клітковині. Всього з підшкірної клітковини було видалено 1203 кліща. Добре збережених кліщів можна було ідентифікувати на основі морфологічних критеріїв, але більшість кліщів були в прогресуючому стані розкладання. Тут морфологічна ідентифікація видів не була успішною. Крім того, методи ПЛР не призвели до успішної ідентифікації видів. За допомогою морфологічної ідентифікації були виявлені такі види та стадії розвитку: Ixodes ricinus (самка, = 289; чоловічий, = 8; німфа, = 1), І. шестикутник (самка, = 2), І. canisuga (самка, = 1). Самець I. ricinus були виявлені поодиноко або копулюються в парі з самками. Підшкірні кліщі локалізувались у трьох переважаючих уражених частинах тіла: вухах, пахвовій та паховій області. Гістологічне дослідження підшкірних кліщів виявило гранулематозний паннікуліт.
Висновки
Наскільки відомо авторам, це перша знахідка дуже поширених підшкірних кліщів у рудих лисиць з Німеччини. Підшкірне розташування кліщів здається дуже поширеним явищем у рудих лисиць, і це правило, а не виняток. Глибоке залягання лонгістростри та тривалий час годування самок, здається, сприяє підшкірному розташуванню. Більшість лисиць були заражені в паховій області, де шкіра тонка і менш волохата.
Передумови
Кліщі, що належать до родів Іксоди і Дермацентор (Родина: Ixodidae) є найбільш поширеними в Європі [1]. На всіх активних стадіях життя кліщів (шестинога личинка, восьминога німфа та самки) для линьки (незрілі особини) або для яйцекладки (самки) потрібні кров’яні страви, за винятком самців, які харчуються факультативно та локалізуються на господарях головним чином для спаровування цілі [1, 2].
У Німеччині вид Ixodes ricinus, І. шестикутник, І. canisuga і І. кайзері часто збирали у лисиць [3,4,5,6,7,8]. Додатково, Dermacentor reticulatus і Haemaphysalis concinna іноді були виявлені прикріпленими до шкіри рудих лисиць [7, 9]. Кліщі зазвичай міцно прикріплюються до зовнішньої поверхні своїх господарів, щоб залишатися на місці для кров’яного борошна. Тим самим ротовий апарат кліща проникає в різні шари шкіри залежно від їх довжини. Кліщі з довгими ротовими апаратами (longirostra, напр. Амбліома, Гіаломма і Іксоди), вбудовані в глибокі шари дерми, тоді як кліщі з короткими ротовими апаратами (brevirostra, напр. Дермацентор, Гемафізаліс і Рипіцефалія) ледве проникає в епідерміс [10, 11]. Ixodes ricinus личинки прикріплюються протягом 2–4 днів, німфи - 4–6 днів, а самки - 6–10 днів [12].
Цікаво, що в деяких випадках кліщі також можуть бути виявлені в підшкірній клітковині у різних господарів, включаючи рудих лисиць. Наявність підшкірних кліщів, таких як I. ricinus, І. шестикутник, I. crenulatus і D. reticulatus було відзначено у рудих лисиць у кількох тематичних дослідженнях з Великобританії, Польщі, Австрії, Румунії, Словаччини та Чехії [13,14,15,16,17,18,19,20]. У США місцеві види кліщів Амбліома американська був також виявлений у підшкірній клітковині рудих лисиць [21].
Окрім рудих лисиць, раніше спостерігались випадки підшкірних кліщів у єнотовидних собак (Nyctereutes procyonoides) з Польщі [22], у собаки зі Швеції [23] та у дитини з Південної Кореї [24].
До цього часу в більшості випадків повідомлялося про невеликі розміри вибірки, а також як випадкові знахідки [13,14,15,16,17, 21]. На даний момент опублікованих даних про підшкірних кліщів у рудих лисиць та інших тварин з Німеччини не існує. Ось чому це дослідження має на меті оцінити частоту підшкірного кліща у рудих лисиць з Німеччини за допомогою великої кількості зразків. Локалізація підшкірних кліщів на різних ділянках тіла рудої лисиці ще не аналізована; тому ми задокументували локалізацію кожного кліща, щоб визначити чисельність цих кліщів у підшкірній клітковині. Точна ідентифікація видів підшкірних кліщів на основі морфологічних критеріїв можлива лише в обмеженій мірі внаслідок прогресивного процесу деградації в підшкірній клітковині, як це видно з попередніх досліджень [18]. Отже, це дослідження спрямоване на використання методів молекулярної біології для виявлення підшкірних кліщів до видового рівня.
Методи
Колекція тварин
У період з листопада 2018 року по лютий 2019 року місцеві мисливці під час традиційного полювання відстрілювали рудих лисиць та іншу дичину. У співпраці зі скребковою станцією (Фельвехсель, Берлін, Німеччина) місцеві мисливці з усієї Німеччини здавали тушки лисиць у поліетиленові пакети з маркуванням дати та точного географічного розташування в морозильних камерах. Мисливцями відбиралися лише дорослі лисиці з хорошим поживним статусом. Тіла лисиці зберігали при - 80 ° C до лущення. Для проведення гістологічних досліджень одній лисиці зняли шкіру безпосередньо після полювання.
Збір та ідентифікація кліщів
Вісцеральну сторону кожного хутра візуально досліджували на наявність підшкірних кліщів. Локалізацію кліщів реєстрували на попередньо намальованій схематичній картинці і призначали десяти конкретним частинам тіла (вуха, шия, пахвова область, плече, спина, живіт, пахова область, аноректальна область, ноги та хвіст) з метою створення тіла карта щільності кліщів (рис. 1), як рекомендували Lydecker et al. [25]. Потім кліщі окремо видаляли з підшкірної клітковини за допомогою щипців із тонкими наконечниками та скальпелем і зберігали при - 20 ° C (рис. 2). Добре збережених кліщів можна було ідентифікувати на основі морфологічних критеріїв згідно зі стандартизованими таксономічними протоколами [26] під бінокуляром із збільшенням 50 × (Motic SMZ-171, Motic Deutschland GmbH, Wetzlar, Німеччина).