Протокол виявлення та розрізування різноманітних жирових депо мишей
Резюме
Адипоцити існують у дискретних депо і виконують різноманітну роль в їх унікальних мікросередовищах. Оскільки регіональні відмінності в характері та функціях адипоцитів виявлені, стандартизована ідентифікація та ізоляція депо має вирішальне значення для просування поля. У цьому документі ми представляємо детальний протокол висічення різних жирових депо миші.
Анотація
Жирові тканини - це складні органи з широким набором функцій, включаючи зберігання та мобілізацію енергії у відповідь на місцеві та глобальні потреби, роз’єднання метаболізму для вироблення тепла та секрецію адипокінів для регулювання гомеостазу та імунних реакцій у всьому тілі. Нові дослідження виявляють важливі регіональні відмінності у розвитку, молекулярному та функціональному профілях адипоцитів, розташованих у дискретних депо у всьому тілі. Різні властивості депо мають медичне значення, оскільки метаболічні захворювання часто демонструють специфічні для депо ефекти. Цей протокол надасть дослідникам детальний анатомічний атлас та посібник з розтину для відтворюваної та точної ідентифікації та висічення різних жирових тканин миші. Стандартизоване розтинання дискретних жирових депо дозволить детально порівняти їх молекулярні та метаболічні характеристики та внесок у місцеві та системні патологічні стани в різних харчових та екологічних умовах.
Вступ
На додаток до того, що вони знаходяться у основних складах WAT та BAT, адипоцити існують у окремих нішах по всьому тілу 4, де вони можуть виконувати спеціалізовані функції у відповідних мікросередовищах. Наприклад, жирова тканина кісткового мозку (BMAT) служить резервуаром ліпідів, є основним джерелом циркулюючого адипонектину і тісно взаємодіє з остеобластами, остеокластами та гемопоетичними клітинами 10, 11. Шкірні адипоцити сприяють широко розповсюдженим процесам, включаючи загоєння ран, імунну відповідь, терморегуляцію та ріст волосяних фолікулів 12, 13. Крім того, епікардіальні адипоцити можуть виробляти кілька адипокінів та хемокінів, які чинять місцевий та системний вплив на розвиток та прогресування ішемічної хвороби 14. Розширення між/внутрішньом’язового ВАТ позитивно корелювало зі збільшенням ожиріння, системною резистентністю до інсуліну та зниженням м’язової сили та рухливості 15. Крім того, підколінні адипоцити служать ліпідним резервуаром для розширення лімфи під час зараження 16. Хоча конкретні ролі різних суглобових депо загалом невідомі, вважається, що депо Хоффа (інфрапателлярне) в коліні зараз сприяє патологіям, включаючи біль у передньому коліні та артроз 17 .
У той час як регіональні відмінності в характері та функції адипоцитів знаходяться під інтенсивним вивченням, в даний час поле обмежене відсутністю стандартизованого протоколу для ідентифікації та дисекції різноманітних депо мишей. Раніше опубліковані методи, як правило, описували ізоляцію одного або двох конкретних депо і не мають рівня деталізації, необхідного для рівномірного висічення 18, 19. Протокол, описаний у цьому рукописі, містить вичерпний посібник для конкретних анатомічних місць та етапів ізоляції багатьох різних жирових депо миші. Незважаючи на те, що склади WAT є основною метою цього рукопису, висічення міжлопаткової BAT також детально описано. Жирові тканини, вирізані за цим протоколом, можуть бути використані для широкого кола експериментальних кінцевих точок, включаючи дослідження експлантатів, гістологію та аналіз експресії генів.
Мета цього рукопису - надати слідчим детальний протокол для чіткого та точного виявлення та ізоляції як відомих, так і менш вивчених жирових складів мишей (Фігура 1). Цей ресурс сприятиме більш повному дослідженню розвитку, молекулярних та функціональних характеристик адипоцитів у різних нішах.
Потрібна передплата. Будь ласка, порекомендуйте JoVE своєму бібліотекареві.
Протокол
Усі процедури на тваринах проводяться із схвалення Інституційного комітету з догляду та використання тварин (IACUC) Мічиганського університету.
ПРИМІТКА: Для цілей цього відеопротоколу використовуються миші C57BL/6J віком від 4 до 6 місяців.