Ресвератрол потенціює рапаміцин для запобігання гіперінсулінемії та ожиріння у мишей-самців із високим вмістом жиру

Предмети

Анотація

Результати

Низькі дози рапаміцину не перешкоджають збільшенню ваги у мишей-самців на HFD

Мишей годували або звичайною їжею, або дієтою з високим вмістом жиру (60% жиру) (рис. 1). На HFD мишей поступово набирали вагу, досягаючи плато через 12 тижнів (група 2; HF). Інших мишей на HFD розподілили на 3 групи, які отримували лікування ресвератролом (група 3), рапаміцином (група 4) та ресвератролом + рапаміцином (група 5). Дозу рапаміцину обирали таку, що вона не суттєво запобігала набору ваги у мишей-самців на HFD. Примітно, що подібні графіки введення рапаміцину суттєво запобігали збільшенню ваги у самок мишей на HFD (рис. 2). По-перше, самки мишей були більш чутливими до рапаміцину порівняно з самцями мишей. По-друге, самки мишей були схильні до збільшення ваги, ніж самці (рис. 2), так що ефект від лікування рапаміцином було легше виявити у самок, ніж у чоловіків. Ресвератрол лише тимчасово (7–8 тижнів) зменшив збільшення ваги (рис. 1). На відміну від цього, комбінація рапаміцину та ресвератролу запобігала збільшенню ваги з високим рівнем значимості (рис. 1; Фігура 1

рапаміцин

Маса тіла мишей на HFD з лікуванням або без нього. Початкова вага тіла кожної миші приймається за 100 відсотків. Зміна ваги визначалася раз на тиждень. 1: RD; 2: HFD; 3: HFD + resv (ресвератрол); 4: HFD + рапа (рапаміцин); 5: HFD + Re + Ra (+ ресвератрол + рапаміцин у комбінації). Наявні дані означають ± S.E.M. Статистично значущі відмінності оцінювали за допомогою Стьюдента т-тест

Вплив HFD та рапаміцину на масу тіла: порівняння мишей самців та самок. Масу тіла кожної миші визначали на початку експерименту (0 тижнів) та через 13 тижнів після початку HFD та лікування рапаміцином у жінок та чоловіків подібного віку (42 та 38,3 тижні відповідно). Наявні дані означають ± S.E.M. Статистично значущі відмінності оцінювали за допомогою Стьюдента т-тест

Рапаміцин та ресвератрол запобігають гіперінсулінемії у мишей на HFD

Рівень інсуліну в крові (a), IGF-1 (), глюкоза (c) і тригліцериди (d) в кінці лікування. Мишей на RD або HFD обробляли ресвератролом, рапаміцином або комбінацією ресвератролу і рапаміцину протягом 13 тижнів, як описано в легенді на малюнку 1. 1: RD; 2: HFD; 3: HFD + resv (ресвератрол); 4: HFD + рапа (рапаміцин); 5: HFD + Re + Ra (+ ресвератрол + рапаміцин у комбінації). В кінці лікування визначали рівень інсуліну, глюкози, тригліцеридів та IGF-1 натще у крові. Наявні дані означають ± S.E.M для кожної групи мишей. Статистично значущі відмінності оцінювали за допомогою Стьюдента т-тест

Співвідношення між метаболічними змінами

Існувала сильна кореляція між вагою та рівнем інсуліну, коли дві групи мишей на двох різних дієтах поєднувались (звичайна дієта (RD) та HFD) (рис. 4а). Лікування рапаміцином та ресвератролом знижувало кореляцію, яка все ще залишалася значною. (Малюнок 3b). Кореляції між рівнем інсуліну та глюкози не було (рис. 4в). Три супергіперинсулінемічні («хворі») миші мали середній рівень глюкози (рис. 4в). Не було статистично значущої кореляції між вагою та тригліцеридами, а також між глюкозою та тригліцеридами.

Співвідношення між інсуліном та вагою ((a) необроблені групи та () всі групи) та інсуліну та глюкози (c) у окремих мишей в кінці лікування. 1: RD; 2: HFD; 3: HFD + resv (ресвератрол); 4: HFD + рапа (рапаміцин); 5: HFD + Re + Ra (+ ресвератрол + рапаміцин у комбінації). Кореляційний аналіз Пірсона р коефіцієнт і значення (два хвости) були виконані за допомогою GraphPad Prism версії 5.00 для Windows

Ресвератрол пригнічує індуковану інсуліном HIF-1-залежну відповідь, не інгібуючи mTOR

Вплив ресвератролу на MTOR-залежну індукцію транскрипції, що реагує на HIF-1, у клітинах RPE. (a), (c): імуноблот-аналіз. Клітини RPE висівали в 10% MEM сироватки крові, а наступного дня середовище замінювали на MEM без сироватки протягом одного дня перед лікуванням. У безсироваткових клітинах MEM клітини обробляли зазначеними концентраціями ресвератролу, а потім інсуліном (a) або сироватка (c). Потім клітини лізували та проводили імуноблот для pS6 та S6. (), (d): Індукція люциферази, що реагує на HIF-1. Клітини трансфікували HRE -Luc (конструкція, що реагує на HIF-люциферазу), як описано раніше. На наступний день клітини обробляли, обробляли зазначеними концентраціями ресвератролу, а потім інсуліном () або сироватка (d). Через 16 год клітини лізували і вимірювали активність люциферази