Роман для прийому всередину протигрипозного проліки AV5075S Журнал антимікробної хіміотерапії Оксфорд

Олександр В. Івачченко, Ян А. Іваненков, Олег Д. Міткін, Павло М. Яманушкін, Вадим В. Бічко, Наталія А. Шевкун, Ольга Василівна Мокрушина, Ольга О. Неволіна, Рубен Н. Карапетян, Ірина А. Лєнева, Ірина Т. Федякіна, Марк С. Веселов, роман-кандидат на пероральний препарат проти грипу AV5075S, Журнал антимікробної хіміотерапії, том 69, випуск 5, травень 2014 року, сторінки 1311–1324, https://doi.org/10.1093/jac/ dkt507

Анотація

Розробка нового кандидата на ліки з покращеною активністю проти нейрамінідази вірусу грипу (NA) порівняно з наявними в даний час терапевтичними препаратами.

Синтезовані сполуки оцінювали in vitro та in vivo. Тривимірна молекулярна стиковка була успішно застосована для класифікації сполук у серії за інгібуючою потужністю. Стабільність досліджували у зразках крові та на моделях тварин. Фармакокінетичне дослідження проводили на собаках та щурах із застосуванням перорального та внутрішньовенного введення.

Новий високопотужний лікарський кандидат [(3R, 4R, 5S) -4- (2,2-дифторацетиламіно) -5-аміно-3- (1-етил-пропокси) -циклогекс-1-енкарбонова кислота; AV5027] та його етиловий ефір проліки (AV5075S) були синтезовані та випробувані. AV5027 та AV5075S проявляють пікомолярну активність щодо вірусу грипу NA. AV5075S інгібував NA на моделі пневмонії, використовуючи адаптований мишами вірус A/Aichi/2/68 (H3N2) значно сильніше, ніж осельтамівір фосфат. На основі експериментальних результатів та теоретичного аналізу був побудований загальний метаболічний шлях для вихідної сполуки.

AV5075S можна обґрунтовано вважати новим кандидатом на пероральний препарат для лікування грипу.

Вступ

Структури осельтамівіру, його аналогів, занамівіру, ланінамівіру та сполук, описаних у цій роботі (AV5027, AV5075, AV5095, AV5102 та AV5092).

Нещодавно ми оголосили про нову сполуку [(3R, 4R, 5S) -4- (2,2-дифторацетиламіно) -5-аміно-3- (1-етил-пропокси) -циклогекс-1-енкарбонова кислота; AV5027] з пікомолярною активністю проти грипу NA. 6 Крім того, було проведено детальне кількісне дослідження співвідношення структура-активність (QSAR) із використанням тривимірного молекулярного стикування та класичного регресійного аналізу. Тут ми описуємо ключові фармакокінетичні особливості та активність in vitro та in vivo (моделі тварин) аналогів AV5027 (AV5075, AV5095, AV5102 та AV5092) (рис. 1), мезилатів (AV5075S та AV5095S) та метаболітів. Ми виявили, що AV5095 утворюється у нейтральному розчині в плазмі людини, собак та щурів ацилюванням AV5075.

Матеріали і методи

Віруси

А/California/7/2009 (H1N1) отримано від ATCC (Манассас, штат Вірджинія, США). Пристосований до миші A/Aichi/2/68 (H3N2) отриманий з Інституту вірусології Івановського (Москва, Росія). Очищені кристали N1 від вірусів A/California/7/2009 (H1N1) були отримані від ATCC.

Тварини

Безпітогенні самки білих безпородних мишей (12–14 г) були отримані з розплідника «Андріївка» (Московська область, Росія). Мишей переносили на карантин протягом 24 годин до зараження. Без мишей CD1 без специфічних патогенів (вік 6 тижнів) та щурів Sprague-Dawley (250–350 г) були отримані з відділення лабораторного розведення тварин Інституту біоорганічної хімії Російської академії наук (Московська область, Росія). Опушені собаки бігль обох статей (10–12 кг) були отримані з Інституту розведення тварин Російського науково-дослідного центру біологічно активних речовин (Московська область, Росія). Щурів Спрег-Доулі поміщали на карантин протягом 10 днів до вивчення фармакокінетики. Тварин утримували в окремих приміщеннях з контрольованим мікрокліматом (температура 18–26 ° C, відносна вологість 30% ± 70%, 8–10 об’ємів повітря в приміщенні на годину та 12 год цикл день/ніч). Догляд та догляд відповідали Керівництву з догляду та використання лабораторних тварин. 7

Аналіз NA

Вплив сполук на активність NA вимірювали за протоколом ВООЗ. 8 В якості флуоресцентного субстрату використовували натрієву сіль 2- (4-метиламбелферил) -α- d -N-ацетилнейрамінової кислоти (MUNANA; Sigma, кат. № M8639), з кінцевою концентрацією 0,1 мМ. Розведений алантоєвий вірус, що містить 800–1200 одиниць флуоресценції MUNANA, змішували з досліджуваною сполукою (0,01–10 000 нМ) у 33 мМ 2- (N-морфоліно) етансульфонової кислоти (рН = 6,5), що містить 4 мМ CaCl2, та інкубували протягом 30 хв. при 37 ° C. Після додавання субстрату та інкубації при 37 ° С протягом 1 години реакцію зупиняли додаванням 0,14 М NaOH у 83% етанолі. Флуоресценцію вимірювали при довжині хвилі збудження 360 нм та довжині хвилі випромінювання 448 нм. Заготовки основи віднімали з показань зразків. Потім значення IC50 обчислювали шляхом побудови графіку відсотка інгібування активності NA проти концентрації інгібітора. Результати були представлені як середнє значення трьох експериментів.