Вплив дієти з високим вмістом жиру у матері на ключові компоненти ендоканабіноїдів плаценти та печінки

Школа медицини, кафедра акушерства та гінекології, Технічний університет, Центр наук про здоров'я в Пермському басейні, Одеса, Техас

Кафедра тваринництва Університету Вайомінгу, Ларамі, штат Вайомінг

Техаський біомедичний науково-дослідний інститут та Південно-західний національний дослідницький центр приматів, Сан-Антоніо, штат Техас

Фармацевтична школа Техаського університету, Центр наук про здоров'я, Амарілло, штат Техас

Університет Алабами в Бірмінгемі, Бірмінгем, Алабама

Фармацевтична школа Техаського університету, Центр наук про здоров'я, Амарілло, штат Техас

Клінічний науково-дослідний інститут, Техаський технічний університет, наука про здоров'я, Лаббок, штат Техас

Кафедра тваринництва Університету Вайомінгу, Ларамі, штат Вайомінг

Адреса для запитів на передрук та іншої кореспонденції: Н. Шлабріц-Луцевич, кафедра акушерства та гінекології, кафедра фармакології та неврології, Технічний університет, Центр наук про здоров'я в Медичній школі Пермського басейну, 800 W. 4th St., Одеса, TX 79763 (електронна пошта: [електронна пошта захищена]).

Анотація

Догляд за тваринами

Для отримання ожиріння жінки-бабуїни нормальної ваги (Папіо spp.) годували дієтою з 45% жиру (HFD; = 11) ad libitum, тоді як контроль (CTR; = 11) з’їв 12% жиру протягом ≥9 міс до зачаття та під час вагітності. Дієтичний склад детально описаний в інших місцях (53, 57). Тварин поселяли в контрольованому зовнішньому середовищі в соціальних клітинах 14–16 самок та одного самця з повною фізичною та соціальною активністю (33). Кесарів розтин проводили під загальним наркозом на 0,9 днів гестації (165 дГА), як описано раніше (57). Тканини плоду, плаценти та матері збирали та зберігали або за допомогою фіксації формаліном (для імуногістохімії), або заморожуванням у рідкому азоті та зберіганням при -80 ° C для кількісного визначення білка/РНК. Усі процедури були затверджені Інституційним комітетом з догляду та використання тварин при Південно-західному національному дослідницькому центрі для приматів (протокол № 1244PC).

Оцінка концентрацій 2-арахідоноїл-гліцерину та анандаміду у сироватці плода та матері за допомогою рідинної хроматографії-мас-спектрометрії/мас-спектрометрії

Кількісна ПЛР зворотної транскрипції в реальному часі

Імуногістохімія

Вестерн-блотинг

Статистичний аналіз

Усі дані зведені як середні значення ± SE. Тести Шапіро-Вілка та Левена використовувались для оцінки нормальності та рівності дисперсії відповідно. Оскільки множинні змінні не відповідали критеріям дисперсійного аналізу 2 × 2 через ненормальний розподіл та дуже малі розміри вибірки, для аналізу ефекту дієти було використано непараметричне розширення тесту Крускала-Уолліса за Шейрером-Рей-Хейром проти CTR), секс плода (чоловіки проти жінки) та дієта × статева взаємодія. Дані CB1R та CB2R від IHC аналізували, використовуючи той самий підхід, але ефекти статевої діяльності плода та дієти × статевої взаємодії не були розраховані через експериментальну установку IHC. Значимість була встановлена на рівні 0,05.

Морфометрія плода та матері

Вага плода впливав на стать плода, але не на режим харчування матері (табл. 1). Зростання ваги матері у тварин, які отримували HFD, наблизився до значущості ( = 0,055).

Таблиця 1. Вага матері та плоду у групах CTR та HFD

Значення є середніми ± SE. CTR, контроль; HFD, дієта з високим вмістом жиру; КС, кесарів розтин. Примітка: HFD тварин годували дієтою з 45% жиру, а CTR - тваринами, що харчувались з раціоном 12% жиру. Оскільки ваги плаценти та печінки представляли відсутні значення, для цих змінних представлені лише описові дані. Вага мату CS - це вага матері на момент кесаревого розтину.

Циркулюючі концентрації 2-AG та AEA в дамбах та їх плодах

Концентрації 2-АГ у матері збільшувались, а концентрації плода зменшувались у групі HFD незалежно від статі плоду (Таблиця 2).

Таблиця 2. Концентрація AEA та 2-AG за дієтою та статтю плода

Значення є середніми ± SE. AEA, анандамід; 2-AG, 2-арахідоноїл гліцерин; CTR, контроль; Харчова дієта з високим вмістом жиру.

Експресія ендоканабіноїдної системи в плаценті та печінці матері та плода

Ендоканабіноїдна система печінки матері та плода.

імуногістохімія.

CB1R експресувався в цитоплазмі (дамбах) та клітинних мембранах (плодах) перипортальних гепатоцитів, які оточують центральну вену та епітелій жовчних проток (рис. 1). Гістоскори не відрізнялися між групами HFD та CTR. Експресія CB2R була помітна у фібробластах сполучної тканини тріади, жовчних проток, перицентральних гепатоцитів та артеріальних стінок (рис. 2), а гістоскори не відрізнялися між групами HFD та CTR.

Рис. 1.Експресія білка ендоканабіноїдного рецептора 1 (CB1R) у печінці матері та плода при дієті з високим вмістом жиру (HFD; = 11) та контролю (CTR; = 10) тварини. A-D: репрезентативні зображення печінки плода від плодів чоловіків (МФ) у CTR ( = 3) та HFD ( = 6) групи. Е-H: печінка плода від жіночих плодів (FF) у CTR ( = 6) та HFD ( = 3) групи. Я-L: материнська печінка дамб з ПМ у CTR ( = 4) та HFD ( = 5) групи. М-: ділянки печінки матері від дам, що несуть FF в CTR ( = 5) та HFD ( = 4) групи. Питання-Т: кількісний аналіз. Сині стрілки вказують на жовчні протоки, зелені стрілки вказують на артерії, рожеві стрілки вказують на центральні вени (CV), а жовті зірочки вказують на ворітну вену. Негативні контролі (пропуск первинних антитіл) показані в A-, вставки (угорі праворуч). Шкала, 20 мкм. Дані представлені як середні значення ± SE. Портальна тріада визначається ворітною веною, жовчною протокою та печінковою артерією.