Захисні ефекти гриба білого ґудзика (Agaricus bisporus) проти печінкового стеатозу у

Афілійований відділ біології клітин пухлини, Науково-дослідний інститут Бекмана, місто Хоуп, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Афілійований відділ біоінформатики, Науково-дослідний інститут Бекмана міста Хоуп, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Афілійований відділ патології, Науково-дослідний інститут міста Хоуп, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Відділення молекулярної та клітинної біології; Науково-дослідний інститут Бекмана міста Надії, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Відділ приналежності біології клітин пухлини, Дослідницький інститут Бекмана міста Надії, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки, Відділ біоінформатики, Дослідницький інститут Бекмана міста Надії, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки, Департамент патології, Науково-дослідний інститут міста Надії, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки, Департамент молекулярної та клітинної біології; Науково-дослідний інститут Бекмана міста Надії, Дуарте, Каліфорнія, Сполучені Штати Америки

Норіко Каная,
Макото Кубо,
Чжен Лю,
Пейгуо Чу,
Чарльз Ван,
Yate-Ching Yuan, Shiuan Chen

Цифри

Анотація

Цитування: Kanaya N, Kubo M, Liu Z, Chu P, Wang C, Chen Y-CYS (2011) Захисні ефекти гриба білого ґудзика (Agaricus bisporus) проти печінкового стеатозу у мишей, що одержують яєчники, як модель жінок у постменопаузі. PLoS ONE 6 (10): e26654. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0026654

Редактор: Френкі Л. Чан, Китайський університет Гонконгу, Гонконг

Отримано: 31 серпня 2011 р .; Прийнято: 30 вересня 2011 р .; Опубліковано: 25 жовтня 2011 р

Фінансування: Цю роботу підтримали гранти, отримані SC від Національного інституту охорони здоров'я (ES08258) та від Грибної ради США та Австралійської асоціації грибників (SC). У спонсорів не було правила щодо проектування досліджень, збору та аналізу даних, рішення про публікацію чи підготовки рукописів.

Конкуруючі інтереси: Автори заявили, що не існує конкуруючих інтересів.

Вступ

Безалкогольна жирова хвороба печінки (НАЖХП) є найпоширенішим захворюванням печінки у дорослих у розвинених країнах [1]. Він характеризується надмірним накопиченням печінкових ліпідів і не пов’язаний із вживанням алкоголю. НАЖХП включає різні патології печінки, починаючи від стеатозу печінки і закінчуючи неалкогольним стеатогепатитом (НАСГ), фіброзом та цирозом. NAFLD асоціюється з метаболічним синдромом, який характеризується ожирінням, діабетом 2 типу, артеріальною гіпертензією та гіпертригліцеридемією у мишей [1], [2]. Також цироз є фактором ризику розвитку портальної гіпертензії, гепатоцелюлярної карциноми та печінкової недостатності [1]. Вважається, що естроген надає захисний ефект на розвиток НАЖХП у жінок [3]. Отже, жінки в постменопаузі мають вищий ризик розвитку НАЖХП через нижчий рівень циркулюючого естрогену [3]. Через збільшення середньої тривалості життя нинішні покоління жінок можуть розраховувати провести принаймні третину свого життя в стані постменопаузи [4]. Рекомендації щодо дієти та способу життя для зменшення загальної маси тіла можуть допомогти уникнути НАЖХП, однак, немає спеціальних препаратів для лікування цього захворювання печінки [5].

Матеріали і методи

Складання дієти WBM

WBM сушили ліофілізацією до стабільного вмісту вологи, а потім розмелювали через дрібну сітку. Мікробіологічні та інші аналітичні вимірювання проводили на збірних зразках/партіях, щоб забезпечити якість порошку WBM для досліджень. Контрольний HFD (45% (мас./Мас.) Жирової дієти) і HFD, модифікований для вмісту ліофілізованого порошку WBM, були виготовлені та придбані у Research Diets, Inc (Нью-Брансвік, Нью-Джерсі) (Таблиця 1). Для дослідження, що підтверджує концепцію, щоб надати остаточні дані, дієта складалася із 120 г порошку WBM/кг HFD, аналогічної дози, яка використовувалась раніше для оцінки ефекту дієти грибів Мукітаке для НАЖХП [9]. Більше того, було показано, що ця терапевтична доза WBM пригнічує ріст молочної залози, залежний від естрогену, та позитивний до ароматази ріст молочної залози, використовуючи модель оголених мишей [10].

Миша експериментальний дизайн

Усі процедури дослідження тварин були затверджені інституційним комітетом з догляду та використання тварин (IACUC) у місті Надія для оцінки та акредитації лабораторного догляду за тваринами та відповідали вимогам NIH. Штам племінного поголів’я C57Bl/6J був отриманий від Jackson Labs. Усі тварини були розміщені в Центрі тваринних ресурсів міста Надії у вентильованих клітинних стійках, мали вільний доступ до води і підтримувались у режимі світлового/темного циклу 12 годин. Було дотримано всіх інституційних вказівок щодо догляду та використання тварин. Протокол цього дослідження був затверджений IACUC (номер протоколу: 08047).

Щоб створити мишачу модель жінок у постменопаузі, семитижневих самок мишей C57B1/6J овариектомировали (OVX, n = 16). Ці миші OVX виробляють естроген лише з екстрагонадальних ділянок і широко використовуються як модель жінок у постменопаузі [4], [15]. Контрольних мишей (фіктивних, n = 16) піддавали фіктивній операції з виживання. Підставних мишей піддавали тій самій загальній хірургічній процедурі, що і мишам OVX, за винятком видалення яєчників. Потім мишей розділили на дві дієтичні групи, по вісім мишей на групу: HFD або HFD + WBM. Дієти розпочали через тиждень після операції і тривали протягом 3 місяців. Конструкція парного годування використовувалася для контролю споживання їжі. Їжу зважували щодня, а контрольній групі через день давали таку ж кількість їжі (за вагою), як групі WBM, щоб забезпечити однакове споживання калорій між групами. На завершення експерименту миші голодували протягом 4 годин перед жертвою. Кров мишей відбирали шляхом серцевої пункції. Після евтаназії мишей відбирали зразки печінки.

Патологічний аналіз

У мишей забирали печінку та вимірювали мокру вагу. Тканини фіксували 10% формаліном протягом ночі, а потім вносили у парафін. П'ятимікронні зрізи вирізали і фарбували гематоксиліном та еозином та досліджували за допомогою світлового мікроскопа.

Вимірювання ферментів печінки

Зразки крові збирали в кінці кожного експерименту шляхом серцевої пункції та центрифугували при 4000 об/хв протягом 10 хвилин для отримання сироватки. Рівні аланінамінотрансферази в сироватці крові (ALT) вимірювали компанія діагностики Antech (Ірвін, Каліфорнія).

Тест на толерантність до глюкози

Тести на толерантність до глюкози проводили через 2 місяці після початку лікувальної дієти. Миші голодували із вільним доступом до питної води протягом 18 годин перед тестом. Вихідні рівні глюкози реєстрували для кожної миші. Мишей викликали навантаженням на глюкозу 1,5 мг глюкози/г маси тіла. Рівні глюкози до, 30, 60, 120 та 180 хв після ін’єкції вимірювали за допомогою глюкометра (Bayer, Німеччина).