Зміст ендометріотичних кіст, особливо висока концентрація вільного заліза, є можливим
Анотація
Призначення: Відомо, що ендометріотичні кісти перетворюються на рак яєчників, такий як прозорі клітинні та ендометріоїдні карциноми. Ми висунули гіпотезу, що багате залізом середовище, що утворюється шляхом повторення крововиливу в ендометріотичні кісти протягом репродуктивного періоду, може відігравати вирішальну роль у канцерогенезі в цистах через індукований залізом стійкий окислювальний стрес.
Експериментальний дизайн: Вміст кіст яєчників людини, включаючи 21 ендометріотичну кісту, 4 ясноклітинні карциноми та 11 неендометріотичних кіст, аналізували на вміст вільного «каталітичного» заліза, лактозидегідрогенази, потенційного антиоксиданту, пероксиду ліпідів та 8-гідрокси-2′- дезоксигуанозин (8-OHdG). Осадження заліза та рівні 8-OHdG також аналізували гістологічно. Форми активного кисню та мутагенність вмісту в ендометріотичній кісті визначали in vitro.
Результати: Концентрація вільного заліза в ендометріотичних кістах (100,9 ммоль/л) була значно вищою, ніж у неендометріотичних кістах (0,075 ммоль/л; Р 10 років) ендометріозу яєчників (6). Патологічно атиповий ендометріоз, який характеризується ендометріотичними залозами з цитологічною та/або архітектурною атипією (7), був зареєстрований у 22,6% (7 з 31) ендометріоїдних та 36,0% (18 з 50) прозороклітинних аденокарцином яєчника, тоді як лише у 1,7% (4 з 255) випадків ординального ендометріозу яєчників (8). Рак яєчників, що виник у ендометріотичній кісті, демонструє переважну частоту прозорих клітинних та ендометріоїдних типів (> 40%), тоді як серозна та муцинозна аденокарцинома переважає у раку яєчників, не пов'язаного з ендометріозом (8), що свідчить про різний механізм канцерогенезу між раком у ендометріотична кіста яєчника та рак яєчників загалом.
Бімолекулярні особливості раку яєчників, що виникли в ендометріотичній кісті, також були широко вивчені, такі як мутація генів K-RAS та PTEN (9), зміна BCL-2 та P53 (10), зниження експресії hMLH та PTEN (11 ) та підвищений фактор росту судинного ендотелію (12). Також повідомляється про втрату гетерозиготності в області онкосупресора при ендометріозі (7, 13) та загальну втрату гетерозиготності при супутньому ендометріозі та карциномі (14). Повідомляється, що генетична мишача модель перитонеального ендометріозу розвивається шляхом індукції онкогенного K-ras та ендометріоїдної аденокарциноми яєчників шляхом подальшої делеції Pten (15). Тому було виявлено кілька молекулярних механізмів, що беруть участь у канцерогенезі ендометріозу. Однак точний механізм, який може пояснити унікальність канцерогенезу в ендометріотичній кісті, ще належить з'ясувати.
Повторне крововилив у кісту протягом менструального циклу та накопичення компонентів крові в кісті характеризуються ендометріотичною кістою. У цьому дослідженні ми зосередили увагу на вмісті ендометріотичних кіст, особливо на високій концентрації вільного заліза як причини канцерогенезу кісти. Під гіпотезою, що рідина ендометріотичних кіст, що містить залізо, сприяє генетичним змінам через окислювальний стрес (16–18) і може бути однією з основних причин злоякісної трансформації ендометріотичних кіст, ми дослідили концентрацію заліза в ендометріотичній кісті та інші кісти. Крім того, ми дослідили продукти окисного стресу у вмісті кіст. Проводили експерименти in vitro, чи може вміст ендометріотичних кіст спричинити пошкодження ДНК чи ні.
Матеріали і методи
Зразки. Зразки були отримані у пацієнтів з кістами яєчників, які отримували хірургічне лікування в Університетській лікарні Кіото за письмовою формою згоди. Вміст кісти яєчника зберігали при -80 ° C відразу після операції або центрифугували при 3000 або 4000 об/хв протягом 10 хв; супернатанти потім зберігали при -80 ° C.
Культура клітин. Встановлені нами безсмертні клітини поверхневого епітелію яєчників підтримувались, як описано раніше (19, 20). Безсмертні клітини залоз ендометрія людини, люб’язно надані доктором С. Кіо (Університет Каназава, Каназава, Японія; посилання 21), та клітинна лінія клітин фібробластів легенів китайського хом'ячка (клітини V79), придбані у RIKEN BioResource Center Cell Bank, культивували в DMEM (Nikken Bio Medical Laboratory), що містить пеніцилін-стрептоміцин (100 одиниць/мл пеніциліну, 100 мкг/мл стрептоміцину; Nacalai Tesque) і 10% фетальної бичачої сироватки (об/об; BioWest).
Виявлення вільного заліза (іонів заліза) в рідині кісти. Реакційну суміш додавали в одноразові пробірки з безіонних металевих пластиків у наступному порядку: 0,5 мл ДНК тимусу теляти натрієвої солі типу I (1 мг/мл; Sigma-Aldrich), 0,05 мл гідрохлориду блеоміцину (1 мг/мл; ласкаво забезпечується Nippon Kayaku), 0,1 мл MgCl2 (50 ммоль/л; Nacalai Tesque), 0,1 мл проби, 0,05 мл HCl (10 ммоль/л; Nacalai Tesque), 0,1 мл надчистої води та 0,1 мл 0,14% аскорбіну розчин кислоти (в/в; Nacalai Tesque). Стандартну криву готували з використанням Fe (NO3) 3, розчиненого в надчистій воді. Зразки рідин ендометріотичних кіст розчиняли в ультрачистій воді від 1 до 40000 разів, щоб отримати концентрацію вільного заліза від 0 до 250 мкмоль/л. Вміст пробірки перемішували до і після додавання аскорбату, а потім інкубували при 37 ° С протягом 2 годин при струшуванні. Потім для зупинки реакції додавали 1 мл 0,1 моль/л ЕДТА (Додзіндо) і вміст пробірки змішували з 1 мл 1% тіобарбітурової кислоти (мас./Об.; Мерк) у 50 ммоль/л NaOH (Nacalai Tesque ) і 1 мл 25% HCl (об/об; Nacalai Tesque). Розчини нагрівали при 100 ° С протягом 15 хв і охолоджували, і хромоген вимірювали за поглинанням при 532 нм.