Білковий фонд Управління біотехнологічного університету штату Айова SDS-PAGE та

Білковий фонд
Відділ біотехнологій університету штату Айова

  • Послуги
    • Документація та аналіз 1D та 2D гелю
    • 2-D гель-електрофорез
    • Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ)
    • Послуги гібридоми
    • Всмоктування в гелі та розчині
    • Ізоелектричне фокусування (IEF)
    • Масовий аналіз MALDI
    • Синтез пептидів
    • Секвенування білків/пептидів
    • Q-ексклюзивна тандемна мас-спектрометрія (LC-MS/MS)
    • SDS-PAGE та електроблотинг
    • Synapt G2-Si HDMS
    • Система зображення тайфунів
  • Приладобудування
  • Збори
  • Форми подання
    • Створіть форми подання
  • Персонал
  • Семінари
    • Майбутні семінари
    • Попередні семінари
  • Посібники/Новини/Інформація
    • Посібники
    • Новини
    • Додаткова інформація
  • Посилання

SDS-PAGE та електроблотинг

В даний час ми використовуємо систему подвійних плитних клітин Mini-PROTEAN II та систему електрофоретичних переносних клітин Mini Trans-Blot, обидві лабораторії Bio-Rad.

Далі наводиться загальний опис SDS-PAGE та блотування для амінокислотного аналізу та секвенування N-кінцевого білка.

SDS-PAGE
Електрофорез додецилсульфат натрію в поліакриламідному гелі (SDS-PAGE) у присутності відновника (2-меркаптоетанол) є методикою розділення поліпептидних субодиниць відповідно до їх молекулярної маси. Протокол передбачає денатурацію зразка білка шляхом нагрівання його в присутності SDS та відновника. SDS зв'язується з білком, змушуючи його розгортатися, тоді як відновник зменшує внутрішньомолекулярні та міжмолекулярні дисульфідні зв'язки. Зв'язування SDS з білком призводить до чистого негативного заряду, і денатурований поліпептид мігруватиме через гель із відомим відсотком акриламіду в присутності прикладеного електричного поля до позитивного електрода (анода). Після завершення електрофорезу гель фарбують Coomassie "Blue R-250 для візуалізації поліпептидних смуг. Молекулярна маса поліпептиду обернено пропорційна його рухливості. Молекулярну масу поліпептидної субодиниці можна оцінити безпосередньо з напівлога графік молекулярної маси стандартних білків у порівнянні з їх рухливістю або з графіку журналу молекулярної маси проти мобільності Поділ білків за допомогою SDS-PAGE є чудовою методикою для отримання індивідуально "очищених" білків.