Більш тривалий час контакту збільшує перехресне забруднення Enterobacter aerogenes від поверхонь до їжі
Пов’язані дані
АНОТАЦІЯ
Це дослідження мало на меті кількісно визначити перехресне забруднення між різними продуктами харчування та загальними кухонними поверхнями, змінюючи час контакту та бактеріальну матрицю, і робити це широко і всебічно. Описані тут результати просувають наше розуміння перехресного забруднення та факторів, що впливають на нього. Це дослідження інформує популярну культуру та покращує наше наукове розуміння перехресного забруднення та факторів, що впливають на нього.
МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ
Штам бактерій і підготовка культури.
Для всіх експериментів (Vivolac Cultures, Indianapolis, IN) використовували непатогенний харчовий мікроорганізм, Enterobacter aerogenes B199A, з характеристиками приєднання, подібними до характеристик сальмонели. Використовуваний тут штам E. aerogenes стійкий до налідиксової кислоти, що дозволяє проводити його перелік у присутності інших мікроорганізмів на зразках їжі або поверхнях. Контрольні експерименти (зроблені шляхом відбору зразків та посіву на триптичний соєвий агар [Difco, BD, Sparks, MD] з 50 мкг/мл налідиксової кислоти [Sigma Chemical Co., St. Louis, MO] [TSA-na]) показали, що налідиксинова кислота -резистентні клітини E. aerogenes спочатку не були присутніми ні в одній їжі або на поверхнях на рівні> 2 log КУО/поверхні або їжі.
Культури були підготовлені на основі попередньої роботи, проведеної в нашій лабораторії (13) та іншими (14). Заморожений запас E. aerogenes у 80% стерильному гліцерині наносили на TSA-na. Одну колонію з кожної пластини переносили в 10 мл триптичного соєвого бульйону (Bacto, BD, Sparks, MD) з 50 мкг/мл налідиксової кислоти (TSB-na) та інкубували при 37 ° C протягом 24 годин. Інокуляційні матриці були двох типів, в одній використовували клітини, зібрані центрифугуванням при 5000 × g протягом 10 хв і двічі промивали 10 мл 0,1% пептону (Difco, BD), а в одній використовували клітини, взяті безпосередньо з інокульованої культури TSB-na на ніч. Кінцеву концентрацію ~ 10 8 КУО/мл перевіряли шляхом підрахунку на TSA-na.
Підготовка побутових поверхонь.
Було використано чотири різні поверхні, типові для побутових середовищ: нержавіюча сталь (тип 304, товщина 0,018 дюйма, калібр 16; OnlineMetals, Сіетл, штат Вашингтон), керамічна глазурована плитка (Brancacci Windrift Beige; Daltile, Dallas, TX), деревина кленового ламінату (північний клен; Mohawk, Calhoun, GA) та внутрішній зовнішній килим (Morella; Foss Manufacturing, Hampton, NH). Їх замовили в Інтернеті або придбали у місцевому магазині дому. Поверхневі матеріали розрізали на купони (5 на 5 см). Купони з нержавіючої сталі та керамічної плитки дезінфікували перед щепленням, замочуючи в 70% етанолі протягом 1 години, видаляли, сушили на повітрі та автоклавували. Дезінфекція деревини та килимових купонів спричинила структурні зміни, тому вони були викинуті після автоклавування після одноразового використання.
Види їжі.
Чотири продукти (кавун, білий хліб [ShopRite, Wakefern Food Corp., Elizabeth, NJ], несолоне масло [ShopRite, Wakefern Food Corp., Елізабет, Нью-Джерсі] та клейкі цукерки [Haribo Strawberries]) були придбані в Інтернеті або у місцевого жителя супермаркет. Цілий кавун перед використанням зберігали при 4 ° C. Кавун (лише м’якоть) та хліб (крім скоринки) нарізали шматочками (приблизно 4 на 4 см). Несолене вершкове масло доносили до температури навколишнього середовища (∼24 ° C) перед тим, як намазувати його на хліб. Усі продукти мали рівноцінні площі контакту (~ 16 см 2). РН та активність води (aW) зразків вимірювали в трьох примірниках з поверхневим зондом pH (Accumet Basic AB15 pH-метр; Fisher Scientific) та aW-метром (Rotronic Instrument Corp., Hauppauge, NY) відповідно.
Перенесення між продуктами харчування та поверхнями.
Сценарії передачі оцінювали для кожного типу поверхні контакту (4), кожного типу їжі (4), чотирьох разів контакту та двох матриць посівних матеріалів, загалом 128 сценаріїв. Кожен сценарій повторювався 20 разів, загалом 2560 вимірювань. Кожному типу контактної поверхні плямисто інокулювали 1 мл інокуляту, використовуючи 8 - 10 крапель, розподілених по 5 - 5-сантиметровій поверхні. Поверхні поміщали в шафу з біобезпеки (SterilGARD Hood; The Baker Company, Inc., Sanford, ME) на 5 год, після чого поверхні були помітно сухими. До 5 годин поверхні були ще вологими, а часом і довше 5 годин, різниця у швидкості відновлення між матрицями інокуляту збільшувалась. Як пептоновий буфер, так і матриці инокулятів TSB-na давали приблизно суми 10% КУО/поверхню після висихання. Їжу скидали на відповідні поверхні за допомогою рук у рукавичках з висоти 12,5 см і залишали відпочивати протягом чотирьох різних часів (колонії E. aerogenes. Тарілки інкубували при температурі 37 ° C протягом 24 годин. Колонії підраховували і рівень популяції виражається в кількості КУО на харчову або поверхневу пробу.
Аналіз даних.
Відсоток передачі обчислювали наступним чином: [загальна кількість їжі КУО/(загальна кількість їжі КУО + загальна поверхня КУО)] × 100. Відсотковий коефіцієнт передачі від поверхні до їжі реєстрували за допомогою Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA) та SigmaPlot (Systat Software Inc., Сан-Хосе, Каліфорнія), оскільки попередні дослідження показали, що нетрансформовані швидкості передачі дуже перекошені, а трансформовані в журнал швидкості передачі приблизно нормально розподілені (13, 31). Коли продукти містять менше межі виявлення (2 log КУО), швидкість передачі розраховувались так, ніби концентрація на продуктах була на межі виявлення. Змінні та взаємодія між змінними вважалися значущими при значенні Р у таблиці 1. Кавун мав найвищий середній показник серед усіх досліджених продуктів. Хліб та масло вимірювали середні значення води, близькі до значень кавуна. AW клейкої цукерки була значно нижчою, ніж у інших вимірюваних харчових продуктів (0,72 проти ≥0,95). У вершковому маслі був найвищий рН (6,25) серед будь-якої із виміряних харчових продуктів, а у гумових цукерок - найнижчий (2,80). Хоча, як відомо, низький рН спричиняє стрес для мікроорганізмів, навряд чи, враховуючи короткий час контакту в цьому дослідженні, це могло б статися в експериментах з клейкими цукерками (32). Виміряні значення рН хліба та кавуна були проміжними (5,80 та 5,43 відповідно).