Дубильна кислота як поліфенол рослинного походження надає захист від судин завдяки посиленню експресії KLF2 у

Предмети

Анотація

Фактор транскрипції Kruppel-подібний фактор 2 (KLF2) є важливою протизапальною та антиатерогенною молекулою в ендотелії судин. Посилення експресії та активності KLF2 покращує функцію ендотелію та запобігає атеросклерозу. Однак фармакологічних та молекулярних регуляторів KLF2 недостатньо. Використовуючи високопродуктивний аналіз репортерів люциферази для виявлення активаторів KLF2, ми визначили дубильну кислоту (ТА), поліфенольну сполуку, як потужний активатор KLF2, який послаблює запалення ендотелію. Механістичні дослідження показали, що TA індукував експресію KLF2 частково через шлях ERK5/MEF2. Функціонально, TA помітно знижував адгезію моноцитів до EC за рахунок зменшення експресії молекули адгезії VCAM1. Використання легеневих ЕК, ізольованих від Klf2 +/ + та Klf2 +/ - мишей, ми показали, що протизапальний ефект ТА залежить від KLF2. У сукупності наші результати демонструють, що ТА є потужним активатором KLF2 і ТА, що ослаблює ендотеліальне запалення через підвищення регуляції KLF2. Наші висновки забезпечують новий механізм добре встановлених корисних серцево-судинних ефектів ТА та припускають, що KLF2 може бути новою терапевтичною мішенню для атеросклеротичних судинних захворювань.

поліфенол

Вступ

На основі цих досліджень модуляція експресії або функції KLF2 може бути новою стратегією для профілактики та лікування запальних захворювань, включаючи атеросклероз 2, 6, 9. Таким чином, метою цього дослідження є скринінг маломолекулярних активаторів, які модулюють експресію KLF2. На основі аналізу на основі люциферази ми виявили, що невелика молекула дубильної кислоти (ТА) є новим активатором KLF2. ТА - це специфічна комерційна форма таніну (різновид рослинного поліфенолу). Попередні дослідження показали, що ТА зменшує формування аортальних уражень у Апо Е -/- миші 19. Однак протизапальна дія ТА на ЕК ще не досліджена. У цьому дослідженні ми наводимо докази того, що ТА індукує експресію ендотеліального KLF2 і тим самим послаблює запалення судинного ендотелію. У сукупності наші результати не тільки визначили ТА як новий активатор KLF2, але також продемонстрували, що KLF2 може служити перспективною терапевтичною мішенню для лікування атеросклерозу.

Матеріали і методи

Культура клітин

Клітини COS-7 (ATCC, Rockville, MD) культивували в DMEM (Corning, Cellgro®, США), що містить 10% фетальної бичачої сироватки (FBS) (Gibco). HCAEC (# 300K-05A, Cell Applications Inc., Сан-Дієго, Каліфорнія) культивували в Meso Endo Cell Growth Media (Cell Applications Inc.), що містить 10% FBS та добавку до зростання (# 212K-500, Cell Applications Inc.) 20 . Для експериментів використовували пасаж 4-6 клітин HCAEC. Ендотеліальні клітини пуповинної вени людини (HUVEC) були виділені з пуповин у нормальних вагітних жінок відповідно до процедур комітету з перегляду випробовуваних в Університеті Рочестера, які передбачають Гельсінську декларацію 20. Людські пуповинні ядра отримуються за інформованою згодою всіх учасників та відповідають стандартам HIPAA для захисту конфіденційності особистої інформації про здоров'я донора. HUVEC культивували в середовищі 200 (# M-200-500, Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA), що містить 10% FBS та добавку з низьким рівнем сироватки (LSGS) (# S-003-10, Thermo Fischer Scientific). Уривки 3–6 HUVEC використовувались для експериментів. Клітини THP-1 (ATCC) вирощували в RPMI 1640, що містить 10% FBS. ЕК легенів підтримували в DMEM, що містить 20% FBS, пеніцилін/стрептоміцин та гепарин. Усі клітини культивували при температурі 37 ° C з 5% CO2 у клітинному інкубаторі.

Трансфекція клітин та активність гена-репортера люциферази

Бібліотека препаратів була отримана з Університету Рочестера Pathway Discovery Resource (Бібліотека сполук спектру NCI, що містить 2400 хімічних сполук, 1 мМ на кожну сполуку). -1,7 кб KLF2-плацеміда люциферази, що керується промотором luc (KLF2-luc), промотор KLF2 -221bp дикого типу (WT) та промотор KLF2 -221bp були надані професором Мукешем Джайном 21. Плазміда KLF2 -221 містить сайт зв'язування MEF2, тоді як у мутантній плазміді KLF2 -221 сайт зв'язування MEF2 мутував.