Галлова кислота пом’якшує індукований диметилнітрозаміном фіброз печінки шляхом зміни Smad
1 Інститут TCM та природних продуктів Школи фармацевтичних наук Університету Ухань, Ухань 430071, Китай
2 Ключова лабораторія МНС з комбінаторного біосинтезу та виявлення наркотиків, Університет Ухань, Ухань 430072, Китай
Анотація
Диметилнітрозамін (ДМН) є потужним гепатотоксином, канцерогеном та мутагеном. У нашому попередньому дослідженні кандидатом галової кислоти (ГА), який широко існує у продуктах харчування та фруктах, було обрано завдяки здатності полегшувати токсичність DMN in vivo. Ми мали на меті дослідити терапевтичний потенціал ГА проти індукованого DMN фіброзу печінки. Протягом перших чотирьох тижнів DMN вводили щурам через інтраперитонеальну ін'єкцію через день, крім контрольної групи. GA або силімарин давали щурам даючи один раз на день з другого по шостий тиждень. ГА значно зменшив пошкодження печінки за показниками сироватки та покращив антиоксидантну здатність у тканинах печінки та нирок. Цитокіни, що беруть участь у фіброзі печінки, вимірювали на рівнях транскрипції та трансляції. Ці результати вказують на те, що ГА виявляє стійкі антиоксидантні та антифіброзні ефекти і може бути ефективним природним ліками для лікування фіброзу печінки.
1. Вступ
У попередньому дослідженні ми довели, що етилацетатна фракція (EF) з плодів Terminalia bellirica має антифібротичну дію in vitro [12]. Аналіз мас-спектрометрії показує, що основними компонентами EF є галова кислота (GA) та елагова кислота (неопубліковані дані). GA, тип фенольної кислоти з сильним антиоксидантним ефектом, можна знайти в білій, червоній і чорній шовковиці, ожині, малині, полуниці, драконі, гуаві, мангостіні, папайї, чайному листі та інших рослинах [13–15] . Оскільки ГА є основним компонентом ЕФ, ми припускаємо, що ГА є основним фактором, що сприяє антифібротичним ефектам ЕФ.
У цьому дослідженні ми прагнемо довести, що ГА здатний реверсувати фіброз печінки, використовуючи тваринну модель фіброзу печінки, індукований ДМН, та досліджувати біомаркери, змінені при лікуванні ГА, після того як печінка щура зазнала субхронічної травми.
2. Матеріали та методи
2.1. Хімікати
Усі використовувані хімічні реагенти та комерційні набори згадані в додатковій таблиці 1.
2.2. Тварини
Загалом 48 самців щурів Sprague Dawley (180–200 г) було придбано в лабораторному центрі тварин Університету Ухань (Ухань, Китай). Вони розміщувались у 12-годинному циклі світло-темрява при 25 ± 2 ° C та відносній вологості 50% -70%. Тварин годували за бажанням за допомогою стандартного раціону гранул і води. Тваринам дозволяли пристосуватися до умов утримання протягом трьох днів перед експериментами. Це дослідження забезпечило отримання дозволу від Інституційного комітету з догляду та використання тварин (IACUC) при Центрі експериментів на тваринах Університету Ухань, Китай.
2.3. Вивчати дизайн
Щурів розділили на шість груп, що складалися з восьми тварин на групу, і проходили шість тижнів лікування. Дизайн роботи над тваринами посилається на Су та ін. [16] та дещо змінений. Схема індукції DMN фіброзу печінки та лікування ГА наведена на малюнку 1. Групі I вводили 0,9% сольовий розчин як контроль; ІІ групі вводили 3 мг/кг та 7 мг/кг ДМН, розчинених у 0,9% сольовому розчині; ІІІ група була позитивною контрольною групою і їй вводили силімарин, 100 мг/кг ТБ; IV група - група з низькими дозами GA, якій вводили 25 мг/кг ТБ; V група була середньодозованою групою GA, якій вводили 50 мг/кг ТБ; і VI групою була група з високими дозами GA, якій вводили 100 мг/кг БВ.
2.4. Визначення маси тіла та органів
Вага тіла реєстрували перед тим, як щурів приносили в жертву вивихом хребта. Після принесення щурів у жертву витягували печінку, нирки та селезінку та негайно зважували.
2.5. Визначення біомаркерів сироватки крові
В кінці експерименту всі щури голодували протягом ночі і приносили жертви на наступний день. Кров витягували з серця і згортали. Сироватку отримували центрифугуванням при 1000g протягом 10 хв і зберігали при -20 ° C до використання. Аланінамінотрансфераза (ALT), аспартатамінотрансфераза (AST), лужна фосфатаза (ALP) та загальний білірубін (TB) визначалися комерційними наборами, що відповідають інструкціям виробників.
2.6. Оцінка окисного стресу в печінці та нирках
Після вилучення та зважування печінки та нирок готували 10% гомогенат тканини печінки або нирок 50 мМ фосфатним буфером натрію (рН 7,4) і центрифугували при 5000g протягом 10 хв при 4 ° C. Супернатанти переносили в нові пробірки і зберігали при -80 ° C для подальших експериментів. Загальний вміст білка визначали за методом Бредфорда. Діяльність супероксиддисмутази (SOD) та каталази (CAT) та рівні глутатіону (GSH) та малонового диальдегіду (MDA) визначали комерційними наборами, дотримуючись етапів, зазначених у посібниках з набору.