Повна стаття висловлює розширення ролі рецептора гіркого смаку в додаткових тканинах рота TAS2R38

Стаття дослідження

  • Повна стаття
  • Цифри та дані
  • Список літератури
  • Цитати
  • Метрики
  • Ліцензування
  • Передруки та дозволи
  • PDF

АНОТАЦІЯ

Вступ

Здатність сприймати гіркоту PROP є спадковою ознакою, а ген, пов'язаний з гірким сприйняттям PROP, - TAS2R38 [7]. Три загальні алельні ізоформи гена TAS2R38 ідентифікують супер-дегустатора (PAV/PAV), дегустатора (PAV/AVI) та не-дегустацію (AVI/AVI) та сайт першого варіанту (P49A) пояснюють значну частину фенотипових варіацій у PROP сприйняття [7–10]. Однак кілька даних продемонстрували, що поліморфізми гена TAS2R38 лише частково пояснюють дисперсію гіркого сприйняття, до якої можуть сприяти інші негенетичні фактори [11, 12].

стаття

За останнє десятиліття стало очевидним, що смакові рецептори експресуються не лише у смакових зародках поверхні язика, але і в надлишкових смакових органах (таких як: травна, дихальна, сечостатева системи, серце, мозок, щитовидна залоза, шкіра, плацента та імунні клітини), що свідчить про те, що різні типи клітин, поза ротовою порожниною, можуть використовувати рецептори смаку [13–15]. Точна роль TAS2R38 поза смаковими системами досі невловима.

Докази того, що особи, що страждають ожирінням, експресують більше імунореактивних клітин TAS2R38 у слизовій оболонці товстої кишки, ніж худорляві особи [16], і що мишам внутрішньошлункове введення гірких хімічних речовин змінює споживання їжі та масу тіла за рахунок вивільнення греліну [17], підтверджують гіпотезу про те, що рецептори смаку можуть бути бере участь у регуляції секреції гормонів апетиту, енергетичному балансі та регулюванні маси тіла. Рецептори солодкого і гіркого смаку експресуються в адипоцитах мишей і впливають на адипогенез, навіть якщо в напрямку ще не ясно [18–21]. Немає даних про наявність та гіпотетичну функцію TAS2R38 в жировій тканині/адипоцитах людини.

Тут ми досліджували експресію TAS2R38 у підшкірній (SAT) та вісцеральній жировій тканині (VAT) у людей із ожирінням та нормальною вагою та її зв’язок із варіантами P49A. Крім того, ми оцінили в пробірці вплив двох різних гірких агоністів на ліпідний обмін.

Матеріали і методи

Зразки жирової тканини

Комітет з етики IRCCS Istituto Auxologico Italiano (Мілан, Італія) схвалив дослідження (https://www.auxologico.it/ricerca-formazione/comitato-etico, код затвердження CE: 2017_05_16_08), і всі суб'єкти дали свою письмову інформовану згоду після повного пояснення дослідження. Ми зібрали біопсії підшкірної (SAT) та вісцеральної (VAT) жирової тканини із загальної кількості 50 осіб, які не страждають на діабет: 32 пацієнтів із ожирінням (20 жінок, 12 чоловіків, вік 45,1 ± 10,9 років, ІМТ 43,1 ± 9,2 кг/м 2) які перенесли баріатричну хірургічну процедуру (наприклад, шлунково-кишковий шлунково-кишковий тракт, шлунковий зв'язок) та 18 осіб з нормальною вагою (11 жінок та 7 чоловіків, вік 43,5 ± 14,1 року, ІМТ 24,2 ± 2,3 кг/м 2), вільних від запальних, інфекційних або неопластичні захворювання, піддані естетичній пластичній хірургії.

Вилучення ДНК та РНК та синтез кДНК

З кожної зібраної біопсії ми виділяли ДНК та РНК. Біопсії гомогенізували за допомогою механічного етапу руйнування з використанням IKA T10 Ultra Turrax (IKA) зі стадією лізису, використовуючи Bashing Beads ультрависокої щільності згідно з інструкціями виробника (дослідження Zymo), потім загальну ДНК екстрагували за допомогою DNA DNA & Набір тканин, дотримуючись інструкцій виробника (Qiagen). РНК екстрагували за допомогою міні-набору RNeasy, дотримуючись інструкцій виробника (Qiagen). Набір без РНКази ДНКази (Qiagen) використовували для перетравлення можливих залишкових ДНК під час очищення РНК за допомогою міні-наборів RNeasy, щоб гарантувати повне видалення ДНК із зразків РНК. Кількості та якість вилученої ДНК/РНК оцінювали за допомогою спектрофотометра NanoDropH ND-1000 (NanoDrop Technologies). КДНК отримували шляхом зворотної транскрипції 500 нг екстрагованої РНК, використовуючи набір синтетичних кДНК SuperScript VILO та Master Mix (Life Technologies).

Кількісна ПЛР у реальному часі (RTqPCR)

Рівні експресії генів TAS2R38, синтази жирних кислот (FASN), активованого проліфератором пероксизоми гамми (PPARγ) та рівня експресії генів транспортера глюкози 4 (GLUT4) починали з 10 нг кДНК за допомогою зондів TaqMan (аналіз на вимогу, Applied Biosystems). Ген ведення домашнього господарства RPLP0 (білок рибосоми людини LP0) був використаний для нормалізації даних завдяки високій стабільності експресії. Дані аналізували за допомогою програмного забезпечення SDS V.3 (Software Diversified Systems) і відносну кількісну оцінку, виражену як довільні одиниці (AU), розраховували за допомогою методу 2 ^ -ΔΔCt.