Структура О-полісахариду та серологічні дослідження ліпополісахариду Протея

Кристина Зич, Андрій Перепелов, Агата Барановська, Агнешка Заблотні, Олександр Сергійович Шашков, Юрій А. Книрель, Зигмунт Сидорчик, Структура О-полісахариду та серологічні дослідження ліпополісахариду Proteus penneri 60, класифікованих як новий Proteus pen FEMS Імунологія та медична мікробіологія, том 43, випуск 3, березень 2005, сторінки 351–356, https://doi.org/10.1016/j.femsim.2004.09.004

серологічні

Анотація

1. Вступ

Грамнегативні умовно-патогенні паличкоподібні бактерії з роду Proteus є поширеною причиною інфекцій сечовивідних шляхів у осіб зі структурними аномальними сечовивідними шляхами або тривалими сечовими катетерами [1]. Вони викликають значну бактеріурію переважно в сечовому міхурі, але також мають схильність до нирок. Протеєві інфекції, мабуть, найбільш відомі через їх асоціацію з утворенням виснажливих каменів у нирках та сечовому міхурі [2]. У роді Proteus є чотири клінічно важливі види: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Proteus penneri та Proteus hauseri [3]. Виявлено багато факторів вірулентності цих організмів, включаючи декілька типів фімбрій, гемолізинів, джгутиків, інвазивність, ріст, що роїться, ферменти, включаючи протеази та сечовини, капсульний полісахарид та ліпополісахарид (ЛПС, ендотоксин) [4, 5].

Серологічна специфічність штамів Proteus визначається хімічною структурою O-полісахаридного ланцюга LPS (O-антигену). На основі O-антигенів штами двох видів, P. mirabilis та P. vulgaris, спочатку класифікували на 49 O-серогруп [6], а пізніше на 11 додаткових серогруп [7]. Для третього медично важливого виду, P. penneri, було запропоновано ще 15 O-серогруп [8, 9]. О-полісахариди більшості досліджених до цього часу штамів P. penneri є кислими завдяки наявності уронових кислот та різних кислих нецукрових компонентів, таких як амінокислоти, молочна та піровиноградна кислоти та фосфатні групи [8–12]. Тепер ми повідомляємо про структуру іншого кислого фосфорильованого O-полісахариду, виділеного із штаму P. penneri 60. На основі унікальної хімічної структури O-полісахариду та лише слабкої серологічної перехресної реактивності O-антисироватки проти P. penneri 60 з Proteus LPS, штам P. penneri 60 класифікували в нову, окрему серогрупу Proteus O70.

2 Матеріали та методи

2.1 Бактеріальні штами та ріст

Proteus penneri 60 був виділений із сечі жінки з бактеріурією в лікарні в Лодзі (Польща). P. vulgaris O8 (17/57), O15 (30/57) та O19 (37/57) були з Чеської національної колекції типів культур (CNCTC, Інститут епідеміології та мікробіології, Прага, Чеська Республіка).

Бактерії вирощували на поживному бульйоні (Варшавська лабораторія сироватки та вакцин, Польща) з додаванням 1% глюкози. Суху бактеріальну масу отримували з аерованої культури, як описано раніше [13].

2.2 Виділення та деградація ліпополісахариду

LPS виділяли із висушених бактеріальних клітин P. penneri 60 екстракцією гарячим водним фенолом [14] та очищали обробкою холодним (4 ° C) водним 50% CCl3CO2H з подальшим діалізом супернатанту. Вихід LPS становив 4,6% висушеної бактеріальної маси (мас./Мас.).

Помірний кислотний гідроліз LPS (100 мг) проводили з водним 2% HOAc при 100 ° C до осадження ліпіду А. Осад видаляли центрифугуванням (13000 г, 20 хв), а супернатант фракціонували за допомогою гель-проникаючої хроматографії ( GPC) на колонці (56 × 2,6 см) смоли Sephadex G-50 (S) (Pharmacia, Швеція) в 0,05 М піридиній ацетатному буфері (pH 4,5) з контролем за допомогою диференціального рефрактометра Кнауера (Німеччина). Вихід отриманого олігосахариду становив 17% від ваги LPS.