USP18 (D4E7) Кролячий mAb

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин THP-1, необроблених або оброблених LPS (1 мкг/мл, 24 години), з використанням USP18 (D4E7) кролячих mAb.

Імунопреципітація USP18 з екстрактів THP-1, оброблених TPA (12-O-тетрадеканоїлфорбол-13-ацетат) # 4174 (80 нМ протягом ночі) та ліпополісахаридів (LPS) # 14011 (1 мкг/мл протягом ночі). Доріжка 1 - це 10% введення, доріжка 2 - це USP18 (D4E7) кролиць mAb, а смуга 3 - це кролик (DA1E) mAb IgG XP ® Isotype Control # 3900. Вестерн-блот-аналіз проводили за допомогою USP18 (D4E7) кролячого mAb. Анти-кролячий IgG, зв'язане з HRP антитіло # 7074 використовували як вторинне антитіло.

USP18 (D4E7) Кролячий mAb 4813

d4e7

Вестерн-блот-аналіз екстрактів з клітин THP-1, необроблених або оброблених LPS (1 мкг/мл, 24 години), з використанням USP18 (D4E7) кролячих mAb.

Імунопреципітація USP18 з екстрактів THP-1, оброблених TPA (12-O-тетрадеканоїлфорбол-13-ацетат) # 4174 (80 нМ протягом ночі) та ліпополісахаридів (LPS) # 14011 (1 мкг/мл протягом ночі). Доріжка 1 - це 10% вхідних даних, доріжка 2 - USP18 (D4E7) кролячий mAb, а смуга 3 - кролячий (DA1E) mAb IgG XP ® Isotype Control # 3900. Вестерн-блот-аналіз проводили, використовуючи USP18 (D4E7) кролячий mAb. Анти-кролячий IgG, зв'язане з HRP антитіло # 7074 використовували як вторинне антитіло.

  • Ваш місцевий представник
  • Ваша інформація про місцеві покупки
  • Гарантія антитіл
  • FAQ
  • Технічна підтримка
  • Супровідні дані
  • Супутні товари
  • Використання продукту
  • Протоколи
  • Передумови
  • Шляхи та білки
  • Цитати та відгуки

Супровідні дані

РЕАКТИВНІСТЬ H
ЧУТЛИВІСТЬ Ендогенні
МВт (кДа) 34, 39
Джерело/Ізотип Кролячий IgG

Ключ програми:

  • W-Західний
  • IP-Імунопреципітація
  • IHC-Імуногістохімія
  • ЧІП-Імунопреципітація хроматину
  • ЯКЩО-Імунофлюоресценція
  • F-Проточна цитометрія
  • E-P-ІФА-пептид

Ключ перехресної реактивності виду:

  • H-Людина
  • М-Миша
  • Р.-Щур
  • Хм-Хом'як
  • Mk-Мавпа
  • Мі-Норка
  • C.-Курка
  • Дм-D. melanogaster
  • X-Ксенопус
  • Z-Данио
  • -Бичачий
  • Dg-Пес
  • Стор-Свиня
  • Доктор-S. cerevisiae
  • Се-C. elegans
  • Хр-Кінь
  • Всі-Очікуються всі види
ISG15 Антитіло # 2743
Фосфо-Stat1 (Tyr701) (58D6) Кролячий mAb # 9167
ISG15 (22D2) Кролячий mAb # 2758
Stat1 (9H2) Миша mAb # 9176
Антитіло Stat1 # 9172
Stat2 (D9J7L) Кролячий mAb # 72604
FastScan ™ Phospho-Stat1 (Tyr701) ELISA Kit # 40716
Фосфо-Stat2 (Tyr690) (D3P2P) Кролячий mAb # 88410
Rig-I (D14G6) Кролячий mAb # 3743
Stat1 (D1K9Y) Кролячий mAb # 14994

Інформація про використання продукту

Розведення для застосування
Вестерн-блотинг 1: 1000
Імунопреципітація 1:50

Зберігання

Поставляється в 10 мМ HEPES натрію (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 100 мкг/мл BSA, 50% гліцерину та менше 0,02% азиду натрію. Зберігати при –20 ° C. Не аліквотуйте антитіло.

Протокол

Вестерн-протокол промокання

Для вестерн-блоттингу інкубуйте мембрану з розведеним первинним антитілом у 5% мас./Об. BSA, 1X TBS, 0,1% Tween ® 20 при 4 ° C з легким струшуванням протягом ночі.

ПРИМІТКА: Будь ласка, зверніться до веб-сторінки первинного продукту антитіл щодо рекомендованого розведення антитіл.

А. Розчини та реагенти

Від підготовки зразка до виявлення, реагенти, необхідні для вашого Western Blot, тепер знаходяться в одному зручному наборі: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

ПРИМІТКА: Приготувати розчини з деіонізованою зворотним осмосом (RODI) або рівноцінною водою.

B. Зміщення білків

Загальний протокол підготовки зразків.

  1. Обробляйте клітини, додаючи свіжий носій, що містить регулятор протягом бажаного часу.
  2. Аспіратні засоби масової інформації з культур; промити клітини 1X PBS; аспірувати.
  3. Лізують клітини шляхом додавання 1X буфера зразка SDS (100 мкл на лунку 6-лункової пластини або 500 мкл для пластини діаметром 10 см). Негайно зішкребіть клітини з пластини і перенесіть екстракт у пробірку для мікроцентрифуги. Тримайся на льоду.
  4. Ультразвук протягом 10–15 с для завершення лізису клітин та зсуву ДНК (для зменшення в’язкості зразка).
  5. Нагрійте 20 мкл зразка до 95-100 ° C протягом 5 хв; прохолодно на льоду.
  6. Мікроцентрифуга протягом 5 хв.

Завантажте 20 мкл на гель SDS-PAGE (10 см x 10 см).

ПРИМІТКА: Рекомендується завантаження попередньо фарбованих маркерів молекулярної маси (# 13953, 5 мкл/смуга) для перевірки електротрансферу та біотинільованих білкових драбин (# 7727, 10 мкл/смуга) для визначення молекулярних ваг.

  • Електротрансфер на нітроцелюлозну мембрану (# 12369).

    • C. Блокування мембрани та інкубації антитіл

    ПРИМІТКА: Обсяги для 10 см х 10 см (100 см 2) мембрани; для мембран різного розміру відповідно регулюйте гучність.

    I. Блокування мембрани

    1. (Необов’язково) Після перенесення промийте нітроцелюлозну мембрану 25 мл TBS протягом 5 хв при кімнатній температурі.
    2. Інкубуйте мембрану в 25 мл блокуючого буфера протягом 1 години при кімнатній температурі.
    3. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.

    II. Первинна інкубація антитіл

    1. Інкубуйте мембрану та первинне антитіло (при відповідному розведенні та розчиннику, як рекомендовано на веб-сторінці продукту) у 10 мл первинного буфера для розведення антитіл, обережно перемішуючи протягом ночі при 4 ° C.
    2. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
    3. Інкубуйте мембрану з анти-кролячим IgG, зв'язаним з HRP антитілом (# 7074 на 1: 2000) та антибіотином, зв'язаним з HRP-антитілом (# 7075 на 1: 1000–1: 3000) для виявлення біотинільованих білкових маркерів у 10 мл блокуючий буфер з легким перемішуванням протягом 1 години при кімнатній температурі.
    4. Промити три рази по 5 хв по 15 мл TBST.
    5. Продовжуйте виявлення (Розділ D).