Дієтичні добавки вітаміну D 3 захищають курей-несучок від індукованого ліпополісахаридом
Анотація
Передумови
Вплив вітаміну D на імунну функцію курей-несучок недостатньо вивчений. Це дослідження досліджувало вплив вітаміну D3 (VD3) на продуктивність несучості та імунологічні функції у несучок кишкова паличка виклик ліпополісахаридів (LPS).
Методи
В першому експерименті 360 штамових шарів Jinghong-1 (32 тижні) були випадковим чином розділені на чотири групи з шістьма повторностями на групу і 15 курей на копію. Курей годували базальним раціоном, доповненим різним рівнем VD3 (0; 500; 1500; або 3000 МО VD3/кг раціону) протягом 10 тижнів для визначення продуктивності несучості, якості яєць та інших параметрів. У експерименті два, 24 кури несучок Jinghong (32 тижні) годувались базальними дієтами з 0 або 3000 МО VD3/кг раціону. Після 10 тижнів годування шістьом курям від кожного лікування вводили внутрішньовенно 8 мг/кг маси тіла або ЛФС, або сольового розчину. Зразки крові та селезінки отримували для аналізу імунних параметрів через 4 год після ін'єкції.
Результати
Дефіцит VD3 знижує несучість та якість яєць; крім того, збільшилось споживання корму та співвідношення корму до яєць. Істотних відмінностей у цих параметрах не спостерігалось, крім міцності яєчної шкаралупи між дієтичними додатковими рівнями VD3 при 500; 1500; і 3000 МО VD3/кг дієти. Дефіцит VD3 підвищує рівень сироваткового гормону (кальцитонін, паратиреоїдний гормон, естрадіол та прогестерон) та рівні цитокінів (IL-6, IL-10), співвідношення IFN-γ до IL-4, активність мієлопероксидази та загальний вміст IgG у сироватці крові, і підвищена регуляція популяції CD3 + Т-клітин у крові. Рецептор селезінки X (RXR), ядерний фактор-kB (NF-κB), індукована синтаза оксиду азоту (iNOS) та рівні мРНК гена полімерного імуноглобулінового рецептора (pIgR) були підвищені у курей з дефіцитом VD3. Дефіцит VD3 суттєво знижує концентрацію фолікулостимулюючого гормону (FSH) та лютеїнізуючого гормону (LH) у сироватці крові та кількість CD4 + CD25 + Т-клітин у крові. Ці зміни були повністю нормалізовані завдяки достатності VD3. LPS знижує концентрацію LH у сироватці крові, лізоцим селезінки та рівень мРНК гена pIgR. LPS індукував збільшення загального рівня IgM у сироватці крові та відсотка CD8 + Т-клітин у крові. Зміни були повністю скасовані шляхом додавання VD3.
Висновок
Добавки VD3 можуть захистити курей-несучок не тільки від дефіциту VD3, але і від імунологічного стресу.
Передумови
Курам-несучкам, що вирощуються в інтенсивних комерційних умовах, часто загрожує велика кількість асоційованих з патогенами молекулярних моделей, таких як ліпополісахариди (LPS), отримані з грамнегативних бактерій, і ліпотейхоєва кислота, отримана з грампозитивних бактерій. Вдихання навколишніх грамнегативних бактерій (зокрема, їх ендотоксинів) є основною проблемою здоров'я птиці. Введення ЛПС курям стимулює імунну систему, активізуючи транскрипцію ядерного фактора (NF) -κB, вивільняючи білки гострої фази та прозапальні цитокіни, викликаючи експресію давальницьких рецепторів 2 (TLR2) і 4 (TLR4), а також модуляцію реакцій антитіл [29], крім того, що викликає такі клінічні симптоми, як лихоманка, анорексія та зниження росту [29, 30].
Методи
Заява про етику тварин
Це дослідження, яке відповідало інституційним та національним рекомендаціям щодо догляду та використання тварин, було схвалено Комітетом експериментів на тваринах Китайського сільськогосподарського університету. Всі зусилля було докладено до мінімізації страждань тварин.
Модель тварини та експериментальні методи лікування
Аналіз проточної цитометрії
Аналіз кальцію та 25-гідроксихолекальциферолу в сироватці крові
Загальний вміст кальцію в сироватці крові (мМ) вимірювали за допомогою видимого спектрофотометра UV-2000 (Unico Instruments Co. Ltd., Шанхай, Китай) за допомогою комерційних наборів для колориметричного аналізу (Інститут біоінженерії Нанкін Цзяньчен, Нанкін, Китай).
Для визначення 25-гідроксихолекальциферолу в сироватці крові (25 (OH) D) зразки сироватки розділяли центрифугуванням при 894 × g протягом 15 хв і заморожували при - 20 ° C. Для оцінки 25 (OH) D, як описано раніше [33], використовували ультрависокопродуктивну рідинну хроматографію – тандемну мас-спектрометрію. Стандартну криву отримували з використанням розведень стандарту 25 (OH) D (Iso Sciences, США).
Аналіз на гормони сироватки крові
Визначали рівні кортикостерону (CORT), кальцитоніну (CT), паратиреоїдного гормону (PTH), естрадіолу (E2), фолікулостимулюючого гормону (FSH), лютеїнізуючого гормону (LH), тестостерону (T) та прогестерону (PG) у сироватці крові. з комерційними наборами радіоімунологічного аналізу (RIA) відповідно до інструкцій виробника (Пекінський північний інститут біологічних технологій, Пекін, Китай).
Комплемент сироватки та аналіз на цитокіни
Мієлопероксидаза сироватки (MPO), компоненти комплементу (C3, C4, C5) вимірювали за допомогою комерційного набору (Інститут біоінженерії Нанкін Цзяньчен). Концентрацію інтерлейкінів у сироватці крові (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10), інтерферону-γ (IFN-γ) та фактора некрозу пухлини-α (TNF-α) визначали комерційно доступні набори ELISA для курячих цитокінів (Пекінський північний інститут біологічних технологій), згідно з протоколом виробника. У кожному аналізі контрольний рекомбінантний курячий цитокін розводили у рекомендованому діапазоні виявлення, щоб сформувати стандартну криву, і лінійність розраховували за допомогою Microsoft Excel 2013 (Microsoft Corporation, Redmond, WA, USA). Р. 2 = 0,99. Концентрації зразків інтерполювали зі стандартної кривої.
Визначення загальних IgG та IgM у сироватці крові
Рівні загального рівня IgG та IgM у сироватці крові визначали кількісно за допомогою наборів ELISA для курячих IgG та IgM (Bethyl Laboratories, Inc., Монтгомері, Техас, США) відповідно до процедури виробника. Зразки сироватки розводили 1: 125 000 для визначення IgG або 1: 10000 для визначення IgM. Планшети зчитували за допомогою зчитувача планшетів ELISA (SepctraMax® i3x Platform, Molecular Devices, LLC, Сан-Хосе, Каліфорнія, США) при 450 нм, і концентрації антитіл у сироватці крові розраховували за допомогою програмного забезпечення Gen 5 (BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, США).