Лікування озоноксиген-пневмоперитонеумом призводить до повної ремісії плоских клітин кролика

Ветеринарні послуги та лабораторна медицина тварин, Університет Філіппа, Марбург, Німеччина

Кафедра отоларингології, хірургії голови та шиї, Університетська лікарня Гіссен та Марбург, Кампус Марбург, Марбург, Німеччина

Відділ діагностичної рентгенології, Університетська лікарня Гіссен та Марбург, Кампус Марбург, Марбург, Німеччина

Кафедра гематології, онкології та імунології, Університетська лікарня Гіссен та Марбург, Кампус Марбург, Марбург, Німеччина

Кафедра молекулярної нейронауки, Інститут анатомії та клітинної біології, Університет Філіппа, Марбург, Німеччина

Департамент молекулярної нейронауки, Інститут анатомії та клітинної біології, Університет Філіпса, вулиця Роберта Коха 8, 35032 Марбург, Німеччина Шукати інші статті цього автора

Ветеринарні послуги та лабораторна медицина тварин, Університет Філіппа, Марбург, Німеччина

Департамент молекулярної нейронауки, Інститут анатомії та клітинної біології, Університет Філіппа, вулиця Роберта Коха 8, 35032 Марбург, Німеччина Шукати інші статті цього автора

Анотація

Плоскоклітинний рак голови та шиї (HNSCC) часто метастазує та демонструє високий рівень смертності у людей та тварин. Будучи прийнятою твариною моделлю для вивчення прогресування та метастатичного поширення HNSCC, у нашому дослідженні була застосована високоагресивна та летальна модель вушної карциноми VX2 новозеландського білого (NZW) кролика 1, 2. Ця модель пухлини виявилася надзвичайно придатною для дослідження нових терапевтичних підходів, оскільки і HNSCC, і карцинома VX2 подібні за ростом, що веде до раннього регіонарного лімфатичного вузла та подальшого віддаленого метастатичного поширення. 3-5

Як і для багатьох видів раку, клітини пухлини HNSCC якимось чином ухиляються від імунної системи організму. Цю імунну втечу частково можна пояснити часто спостерігається зниженням регуляції або втратою детермінант 6, 7 класу МНС класу I та збільшенням CD4 + CD25 + регуляторних Т-клітин (Treg), які виявляються відповідальними за депресивний протипухлинний імунітет. 8-10 Отже, можливість активувати імуноспостереження щодо пухлинних клітин HNSCC повинна допомогти у розпізнаванні та викоріненні цієї пухлинної сутності. Посилення здатності до імунологічного нагляду є новою концепцією в останніх імунотерапіях раку, 11-13, особливо тих, що зосереджуються на імуномодуляторах або регуляторах імунної відповіді. 14 Для посилення імунної відповіді хазяїна проти ракових клітин в даний час проводяться дослідження терапії рекомбінантними цитокінами, імунізації дендритних клітин та вакцинації проти пухлинних антигенів, а також імунотерапії на основі Т-клітин. 15-17

Озон, недавно виявлений ендогенним продукуванням гранулоцитів, 18 - це газ із комплексним впливом на біологію вільнорадикальних організмів людини та тварин. Більшість досліджень біологічного впливу озону зосереджувались на його токсичності для легенів через вдихання навколишнього озону. 20, 21 Тому застосування дихальних шляхів обмежене в природних умовах дослідження медичного озону при захворюваннях людини. Цікаво, що озон виявляв потужну захисну дію на індукований полімікробними препаратами летальний сепсис, не виявляючи токсичності для легенів при застосуванні у вигляді газової суміші O3/O2 в очеревину. 22 Крім того, докази каталізованого антитілами утворення озону при знищенні бактерій 23 свідчать про імунні опосередковані ефекти ендогенно продукованого або екзогенно застосованого озону. Ранній в пробірці Дослідження описували озон як радіоміметичний газ24, здатний вибірково пригнічувати ріст ізольованих альвеолярних, маткових, грудних та ендометріальних карцином людини. 25

Це привело нас до припущення, що внутрішньочеревне застосування медичної газової суміші O3/O2 стимулює власний протипухлинний імуноспостереження організму.

Матеріал і методи

Тварини

У дослідженні взяли участь 59 здорових дорослих кролів Іфафа Кредо NZW, які живуть у вазі від 2,0 до 3,0 кг, і були придбані у Charles River WIGA, Сульцфельд, Німеччина. Всіх тварин утримували у приміщеннях зі стандартизованим кондиціонером: при 20–22 ° C, вологості 50–60% та штучному денному/нічному ритмі протягом 12 годин. Кожного кролика містили в окремій сталевій клітці, годували 100 г повноцінних дієтичних гранул на день і мали вільний доступ до підкисленої (гідрохлоридна кислота, рН 2,7) водопровідної води ad libitum. Тварини могли акліматизуватися принаймні за 5 днів до початку експериментальної процедури.

Експериментальне проектування та трансплантація пухлини

Зображено експериментальний дизайн цього дослідження для (a) схема лікування та () швидкість повторного захоплення після імунного придушення кроликів. * Часові точки забору крові

Пригнічення імунітету

Комп'ютерна томографія

Кроликам попередньо призначали 0,1 мл/кг маси тіла глікопіролату підшкірно та знеболювали комбінацією 5 мг/кг ксилазину та 30 мг/кг кетаміну шляхом внутрішньом’язової ін’єкції. Комп’ютерна томографія грудної клітки створена за допомогою Siemens Somatom Plus 4 (Siemens, Ерланген, Німеччина).

Параметри крові

Зразки артеріальної крові з центральної вушної артерії лівого вільного від пухлини вуха відбирали на 14-й день після щеплення (безпосередньо перед першою газовою інсуфляцією/підробленою обробкою) та на 19-й день після щеплення (24 години після останньої газової інсуфляції/підробленої обробки) . Додаткові проби крові були взяті у день 90 у тварин O3/O2-Рим (рис. 1a). Для гематологічних досліджень ми використовували автоаналізатор (Vet abc ™ Counter Animal Blood Counter, ABX Diagnostics, Геттінген, Німеччина), який був ретельно відрегульований та перевірений для аналізу крові кроликів. Для диференціальних показників крові визначали кількість еритроцитів разом із гематокритом (HCT) та гемоглобіном (HGB). Білі кров’яні клітини далі диференціювали на гранулоцити, лімфоцити та моноцити. Дані були виражені як середні значення ± SEM. Для клінічних хімічних досліджень вимірювали значення креатиніну, GOT та GPT за допомогою системи Reflovet® Plus (Roche Diagnostics, Мангейм, Німеччина) для моніторингу функцій нирок та печінки.