Варіанти гена рецептора меланокортину-3 при захворюванні на ожиріння Міжнародний журнал ожиріння
Анотація
ІНФОРМАЦІЯ: Дослідження зв'язків та нокаутів на мишах свідчать про те, що меланокортин-3-рецептор (MC3R) є кандидатом на ген ожиріння.
ЦІЛЬ: Щоб оцінити, чи мутації MC3R лежать в основі захворюваності на ожиріння.
ПРЕДМЕТИ І МЕТОДИ: Кодування MC3R та 5 ′ -фланговані області були послідовно розподілені у 48 суб’єктів, а виявлені варіанти генотипували у 252 фіні, що страждають ожирінням (ІМТ ≥40 кг/м 2). Зміни гелю використовували для вивчення того, чи мутація передбачуваного промотору змінює зв'язування GATA-фактора.
РЕЗУЛЬТАТИ: Було знайдено три найпоширеніші варіанти MC3R: 17C> Варіант, що змінює Thr6 → Lys на 16%, 241G> Варіант, що змінює Val81 → Ile на 15%, і заміщення −239A> G у місці зв'язування GATA у 21% випробовуваних. Ще чотири варіанти були виявлені в 5 'фланговій області. Частота трьох типових варіантів не відрізнялася у пацієнтів із ожирінням та контолом. Серед страждаючих ожирінням варіанти 17C> A та 241G> A були спільно передані та пов'язані із збільшенням співвідношення інсулін-глюкоза ( G мутація.
ВИСНОВКИ: Варіанти гена MC3R є загальними і не пояснюють захворюваність на ожиріння у людей. Ці варіанти пов’язані з незначними змінами в початку набору ваги, гіперлептинемією та співвідношенням інсулін – глюкоза. Мутація -239A> G скасовує зв'язування GATA-4 з промоторною областю MC3R.
Вступ
Частка жиру в організмі відображається циркулюючими рівнями лептину та інсуліну, а тривалий гомеостаз маси тіла досягається шляхом інтеграції цих гормональних сигналів центрами гіпоталамусу. 1,2,3 Нейропептиди, отримані з попередника АКТГ проопіомеланокортину (POMC) та меланокортинових рецепторів (MCR), відіграють ключову роль у цьому складному контролі апетиту та маси тіла. 1,2 MC3R і MC4R сильно виражені в областях мозку, що беруть участь у регулюванні енергетичного балансу. 2 MC4R відіграє важливу роль в енергетичному гомеостазі, оскільки цілеспрямоване порушення викликає гіперфагію та ожиріння у мишей. 4 мутації MC4R лежать в основі до 4% важкого ожиріння на початку захворювання або у дорослих. 5,6 Спостережувана зв'язок між ожирінням та хромосомною областю 20q13 також робить ген MC3R правдоподібним кандидатом для ожиріння людини. 7 Крім того, порушення MC3R у мишей призводить до збільшення жирової маси, гіперлептинемії та резистентності до інсуліну. 8,9 Ми розглянули, чи мутації гена MC3R лежать в основі захворюваності на ожиріння та/або пов'язані із зміною метаболічних параметрів.
Предмети та методи
У 1989–1995 рр. Було зібрано когорту з 252 пацієнтів із ожирінням (ІМТ ≥40 кг/м 2, 182 жінки/70 чоловіків, вік 21–67 років, поширеність діабету та гіпертонії 24 та 45%). 10 Історія розвитку ваги оцінювалася за допомогою опитувальника. Для виявлення мутації 1400 bp 5 ′ -флангованої області та всієї кодуючої області гена MC3R були секвенувані у 48 суб’єктів, а варіанти виявлені генотиповано в решті когорти. Зразки крові від 312 здорових донорів крові (153 жінки та 159 чоловіків) з Фінської служби переливання крові Червоного Хреста служили контролем для оцінки частоти алелів у фоновій популяції. Концентрації лептину визначали за допомогою радіоімунологічного аналізу (Linco Research Inc., Сент-Чарльз, Міссурі, США), а інтра- та інтерактивні CV менше 5%. Рівні глюкози, інсуліну та ліпідів вимірювали, як описано раніше. 10
Секвенування та генотипування ДНК
Після ПЛР ген MC3R секвенували за допомогою пар праймерів: 5 ′ - IndexTerm TGACCAGAGCAGACTACTTTCA-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm TGAGCAAAGACAACAGCCACT-3 ′; 5 ′ - IndexTerm TCTTCTTCCACCCCAGACTC-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm GCAAGACAGGGGATGTGTTA-3 ′; 5 ′ - IndexTerm CCCTTGGCCAATATGAAAAA-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm CCAGATACGTCTTTTGGATGC-3 ′; 5 ′ - IndexTerm TCTCTACCCTCCCCATCCTT-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm GGGCATTGGACACACTTACC-3 ′; 5 ′ - IndexTerm CATCGTCAGTCTGCTGGAAA-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm GAGCATCATGGCGAAGAAC-3 ′; та 5 ′ - IndexTerm CTCGGAGAGCAAAATATGGTCA-3 ′ та 5 ′ - IndexTerm TCACGTGGATGGAAAGTCAA-3 ′. Секвенування проводили за допомогою секвенсора ДНК ABI Prism 377. Генотипування варіантів -239A> G, 17C> A та 241G> A проводили з використанням ферментів рестрикції AlwЯ, HpyCH4IV та BseDI, відповідно, і гель-електрофорез.
Аналіз електрофоретичної мобільності (EMSA)
Ядерні білки готували 11 з клітини пухлини миші Сертолі MSC-1, Т-клітинної лімфоми Jurkat та ліній фібробластів NIH 3T3, експресуючи GATA-4 та GATA-6 (MSC-1), GATA-3 (Jurkat) та не відомих GATA білки (NIH-3T3). Зонди були підготовлені відпалом олігонуклеотидів 5 ′ - IndexTerm TTTCTATGTAAACAAGATAAAAACTGCTCCTCCT-3 ′ (що відповідає нуклеотидам -253-222) та 5 ′ - IndexTerm AGGAGGAGCAGTTTTTATTTTTTATATATATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTATATATATATTTTTTATATATATATTTATGGATAAAAACTGCTCCTCCT-3 ′ і 5 ′ - IndexTerm AGGAGGAGCA-GTTTTTATCC.TGTTTACATAGAAA-3 ′ (MCR3mut, −239A> G-мутація підкреслено) та 5 ′ - IndexTerm CCCATAAAGATAGGGA-3 ′ і 5 ′ - IndexTerm TCCCTATCTTTATGGG-3 ′ (відповідає нуклеотидам β-182 до 18182 -1) ген). Один з олігонуклеотидів кожного зонда перед відпалом був 5-кінцево міченим [γ- 32 P] АТФ. Реакції зв'язування проводили, як описано. 13 Антитіла були від компанії Santa Cruz Biotechnology Inc. (Санта-Крус, Каліфорнія).